通过ARCHITECT系统分析干血清性能及HBV、HCV、HIV病毒检测方法.pdfVIP

老师，大家下午好，我是检验3班的旸，今天我要和大家的题目是：通

过ARCHITECT系统分析干性能特点和两种扩增的方法检测HBV，HCV和HIV病

毒。

接下来，我将从以下五个方面进行讲解，首先是研究背景

目前全世界无症状携带者(HBsAg携带者)超过2.8亿,我国约占1.3亿。多数无

症状，其中1/3出现肝损害的临床表现。目前我国有患者已超过300万。目前，检测

HBV常用的方法有ELISA、荧光定量PCR。

内地报告的丙型肝炎病例也是逐年上升，2008年发数已达十二万，是2003年

的六倍，近年来，丙肝病死率也是居高不下，其率在所有疾病中排在第五位。目前

常用的HCV检测方法有重组免疫印迹法（RIBA）、RT-PCR、b。

全球平均每天有1.4的HIV者，已发病达6千万，达2千多万。我国的香

港、和大陆均有且呈上升趋势我国于2006年1月底者65万多例,患者7.5万,

1万多。目前常用检测方法ELISA、CLIA、RT-PCR、d、序列扩增实验。

接下来是方法，再说讲述方法之前，我们要先了解一下ARCHITECT系统的组成和原

理。ARCHITECT系统包括运行模块，样品处理模块和，采用的原理如图所示：

1.在样品检测过程中，微粒子（磁性微粒子包被的捕捉分子）与样品在反应杯中混

合，在孵育过程中，样品中的被分析物与微粒子上的捕捉抗原相互反应结合，形

成免疫复合物。

2.孵育后，磁石将磁性微粒子（包括特异性的分析物）吸附在反应杯的管壁上，反

应复合物被去除未结合的物质，然后继续进定。

3.反应复合物在反应杯中与吖啶酯标记的连接物反应结合，反应结束后，反应复合

物被去除未结合的物质。

4.预激发液（HO）被加入进行本底读数，预激发液具有以下功能：

22

⚫建立一个酸性环境，防止能量的过早释放（光）

⚫防止微粒子的凝集

⚫将吖啶酯从反应复合物中脱离下来，为吖啶酯的下步反应做准备

然后系统在反应复合物中加入激发液（NaOH），吖啶酯在过氧化物和碱性溶液中发生氧

化反应，这引起化学发光反应的发生。N-methylacridone形成并释放能量（光），

并返回到基态。

5.要检测被分析物存在的量，CMIA光路系统通过预先确定好的时间化学发光发

射的量（活动读数），可计算分析物的浓度，或根据Index（截断值）来定性进行

判断。

方法：首先是前期准备包括搜集726例患者的配对/DBS样本，与此同时，要与受

试者签订生物化学、细菌学和学的同意书，还要获得的批准。接下

来就是检测了首先要准备DBS：1通过Whatman/Schleicher和Schüll#903滤纸过滤100ul

全血，干燥一晚。21000rpm离心洗脱液2分钟.3将DBS

加入1000ul缓冲液中，室温下振摇一晚的时间进行洗脱。

4重复上述操作两次

2)核苷酸抽提：通过使用NA通用套件的MagNaPure96系统（Roche

诊断，曼海姆，德国）对和DBS洗脱液进行核苷酸抽

提

3）定性：阿图斯HBVLCPCR和VERSANTHCVRNA定性（TMA）系

统定性测定HBV