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拟南芥缺磷超敏突变体cks1的研究

摘要

磷是植物生长发育最重要的营养元素之一，在磷饥饿胁迫条件下，植物通过调整根系构型，改变生理代谢以及与菌类共生等方式来提高磷的吸收和利用。磷饥饿胁迫条件下，拟南芥主根伸长受抑制，侧根和根毛增生。细胞分裂素（CTK）信号系统参与缺磷信号系统的调控。CTK作为植物生长发育过程中的重要激素，在植物生长，根系发育，以及衰老进程中起重要作用。CTK能够促进地上部的生长，并抑制根系的发育。我们通过筛选拟南芥T-DNA插入突变体库获得两个在CTK和缺磷处理条件下根系构型发生超敏变化的突变体cks1-1、cks1-2（CytokininSensitive1）。通过对该突变体的研究，得出以下结论：1.突变体cks1在缺磷条件下，主根生长受到严重抑制，其长度约为野生型的30%。在缺磷早期，突变体表皮细胞伸长受到抑制。发芽后第四天，CYCB1：GUS转基因材料显示突变体cks1分生区的细胞分裂活力消失。这些变化的时间点都早于野生型。突变体cks1根分生组织区大小约为野生型的4/5。根成熟区表皮细胞的长度也低于野生型。2.突变体cks1植株内CTK含量的下降。定量PCR检测显示CTK合成相关基因及CTK信号转导相关基因，ARR5，ARR6，CRE1的表达在突变体中受到严重抑制。4.体内无机磷含量分析表明突变体cks1与野生型无显著差异。加入可吸收利用磷的替代物亚磷酸盐，突变体cks1的表型与野生型相似。RT-PCR分析表明，磷饥饿特异诱导基因（PSI：phosphateStarvationinduced）PHT1；1，RNS1在突变体中受抑制。这表明突变体cks1缺磷超敏表型是由于突变体cks1对磷信号响应改变引起的。5.Tail-PCR分析表明，突变体cks1-1的T-DNA插入在基因（AT2G22300）ATG5’端-2949bp。cks1-2的T-DNA插入在距ATG3324bp。该基因编码钙调蛋白结合转录激活子（AtCMTA3）。RT-PCR分析显示，AtCMTA3的表达在两个等位突变体中均受到严重抑制。6.转基因回复实验结果表明，突变体对磷饥饿与外源CTK（6-BA：6一苄氨基嘌呤）超敏表型由AtCMTA3基因表达受抑制引起。

第一章文献综述

1.1磷在植物生长发育中的作用

磷是植物生长发育所必需的大量营养元素之一。它是植物体内许多重要生物大分子如核酸、磷脂和ATP等的组成成分，参与植物体内的物质代谢、能量代谢和信号转导等生理过程。缺磷会严重影响植物的生长发育，导致植株矮小、叶片失绿、根系发育不良等症状。在自然生态系统和农业生产中，土壤中的有效磷含量往往较低，不能满足植物生长发育的需求。因此，研究植物对磷营养的吸收、利用和调控机制具有重要的理论和实践意义。

1.2植物对缺磷胁迫的响应机制

1.2.1形态学响应

在缺磷胁迫下，植物根系构型会发生显著变化，以增加对磷的吸收面积和吸收效率。例如，拟南芥主根伸长受抑制，侧根数量增加和根毛密度增大。这些变化有助于植物在土壤中更广泛地探索和吸收磷素。

1.2.2生理学响应

植物在缺磷条件下会通过调整生理代谢来适应磷胁迫。一方面，植物会增加酸性磷酸酶、核糖核酸酶等的活性，促进体内有机磷的水解和再利用；另一方面，植物会改变细胞膜的磷脂组成，减少对磷的需求。

1.2.3分子生物学响应

分子水平上，植物在缺磷胁迫下会启动一系列磷饥饿响应基因（PSI基因）的表达，这些基因参与磷的吸收、转运、代谢和调控等过程。例如，PHT1家族基因编码的磷转运蛋白在缺磷条件下表达上调，增强植物对磷的吸收能力。

1.3细胞分裂素（CTK）在植物生长发育中的作用

1.3.1CTK的合成与代谢

CTK是一类腺嘌呤衍生物，主要在植物根尖合成，然后通过木质部运输到地上部分。CTK的合成途径主要有从头合成途径和tRNA降解途径。CTK在植物体内会被细胞分裂素氧化酶等降解失活。

1.3.2CTK对植物生长发育的调控

CTK在植物生长发育过程中具有广泛的调控作用。它能够促进细胞分裂、延缓叶片衰老、促进侧芽生长、调节植物的光形态建成等。在根系发育方面，CTK抑制主根伸长，促进侧根和不定根的形成。

1.4CTK信号转导途径

CTK信号转导途径主要包括组氨酸激酶（HK）、组氨酸磷酸转移蛋白（HP）和反应调节蛋白（RR）等元件。CTK首先与位于细胞膜上的HK受体结合，激活HK的激酶活性，使HK自身磷酸化。然后，磷酸基团通过HP传递到细胞核内的RR上，激活RR的转录调节活性，从而调控下游基因的表达。

1.5CTK