RNA指导的DNA复制逆转录及病毒的复制.pptVIP

第30页，共42页。第1页，共42页。逆转录酶（reversetranscription)

1964年，Temin发现Rous肉瘤病毒等RNA病毒所造成的感染可被DNA合成抑制剂遏制。表明：RNA肿瘤病毒的RNA复制过程中要合成DNA。Temin又发现放线菌素D能抑制致癌RNA病毒的复制，但不能抑制一般RNA病毒的复制。表明：转录对于RNA病毒增殖是必需的。第2页，共42页。Temin提出前病毒假说：原病毒DNA是RNA肿瘤病毒在复制和致癌中的中间物。1970年，Temin在Rouse肉瘤病毒、Baltimore在白血病病毒中发现逆转录酶。第3页，共42页。多功能酶：

1、RNA指导的DNA聚合酶活性2、RNA酶H（RNaseH）活性：水解RNA-DNA杂交体上的RNA3、DNA指导的DNA聚合酶活性：合成互补DNA。4、没有3`→5`外切酶活性。第4页，共42页。特点：

含有Zn2+（是否有锌指结构、DNA结合功能？）DNA合成反应要求有模板和引物。需适当浓度的二价阳离子（Mg2+、Mn2+）5’→3’合成方向→第5页，共42页。逆转录病毒的基因

组复制过程第一阶段：合成负股cDNA的大部分第二阶段：以负股DNA为模板合成一小部分正股DNA链。第三阶段：完成cDNA的全部复制。第6页，共42页。第7页，共42页。第8页，共42页。第9页，共42页。乙肝病毒基因组的复制其复制需通过逆转录过程经RNA中间体实现，其DNA聚合酶也是一种逆转录酶。第10页，共42页。第11页，共42页。逆转录病毒：RNA→DNA→RNA乙肝病毒：DNA→RNA→DNA第12页，共42页。试管内cDNA的合成常用于获得或研究真核生物基因的方法。提取某一种特定的mRNA，经逆转录生成的cDNA可代表某一特定基因。常用的逆转录酶有两种：来自鸟类成髓细胞瘤逆转录病毒称为AMV-RT；来自鼠白血病毒称为MMLV-RT。第13页，共42页。第14页，共42页。病毒RNA复制的主要方式1、病毒含有正链RNA，如灰质炎病毒。RNA（+）→蛋白质（酶）→RNA复制2、病毒含有负链RNA和复制酶如狂犬病毒。RNA（-）→RNA（+）→蛋白质、复制病毒RNA（-）。3、病毒含有双链RNA和复制酶。如呼肠孤病毒。双链RNA→RNA（+）→蛋白质→RNA（-）→双链RNA4、逆转录病毒。第15页，共42页。讨论题如何知道DNA复制中先要有RNA引物的合成？(原料/新合成DNA序列分析/专一核酸酶水解)第16页，共42页。病毒的复制

病毒在活细胞内，以其基因为模板，在酶的作用下，分别合成病毒基因及蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这种方式称为复制（replication)。从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制和病毒蛋白合成，至释放出子代病毒的全过程，称为一个复制周期。病毒的复制周期主要包括吸附和穿入、脱壳、生物合成、组装和释放四个连续步骤。第17页，共42页。复制周期第18页，共42页。病毒的一步生长曲线病毒的一步生长曲线：以感染时间为横坐标，病毒效价为纵坐标，绘制出的病毒特征曲线。第19页，共42页。一、吸附和穿入（一）吸附(adsorption)分两个阶段：静电吸附：病毒体与细胞接触，进行静电结合。非特异性、可逆。真正的吸附：病毒体表面位点（蛋白质结构）与宿主细胞膜上相应的受体结合。是决定病毒感染的真正开始。第20页，共42页。裸露病毒的吸附第21页，共42页。囊膜病毒的吸附第22页，共42页。（二）穿入(penetration)病毒体吸附在宿主细胞膜上后，可通过数种穿入方式进入细胞：1.无囊膜的病毒一般经过细胞膜吞入，称为病毒胞饮,如腺病毒、小RNA病毒等第23页，共42页。病毒胞饮第24页，共42页。2.有囊膜的病毒囊膜与宿主细胞膜融合，病毒的核衣壳直接进入细胞浆内病毒胞饮:细胞膜吞入第25页，共42页。(1)膜融合后进入第26页，共42页。(2)病毒胞饮第27页，共42页。二、脱壳(uncoating)不同病毒脱壳方式不一，多数在宿主细胞溶酶体酶作用下脱壳，释放出基因组核酸。第28页，共42页。三、生物合成(biosynthesis)病毒基因组一旦从衣壳中释放后，就利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量的病毒核酸和结构蛋白。早期，根据病毒基因组转录成mRNA、指令合成转录合成所必需的复制酶和