武汉尚恩生物：从抗体到配色 一步到位超省心.docxVIP

武汉尚恩生物：从抗体到配色一步到位超省心

众所周知，抗原抗体反应是特异性结合的，诸多利用抗原抗体反应原理的实验例如ELISA、WB、IF、IHC、IP等均是建立在抗原抗体反应特异性的基础上的，为了达到最佳实验效果，降低非特异性吸附以提升检测效果和可信度成为实验的重点之一。流式实验作为抗体应用范围之一，非特异性吸附的降低也十分重要，下面我们一起了解下流式实验中常见的非特异性结合原因和解决办法。

一、流式抗体使用过量

流式抗体使用浓度过高时，由于过高的使用浓度会大大提高非特异性结合的概率，这个在其他抗体应用实验中也是很常见的非特异性结合原因。在使用抗体时，建议按照厂家的推荐使用浓度使用，也可以根据自身样本和实验需求，摸索最合适的抗体使用浓度以达到最佳使用效果。同时注意，孵育时间过长也可能增加非特异性结合的概率哦，最好参考厂家指导的孵育时间。

二、非特异性黏附

抗体或染料分子可能通过疏水作用或静电吸附与细胞膜、细胞骨架成分或其他蛋白非特异结合，这种黏附基本不分样本不分蛋白。因此，在样本洗涤液、封闭液或者抗体孵育液中通常含有胎牛血清或者BSA，以封闭这些位点尽量降低流式抗体非特异性黏附的可能。

三、Fc受体结合

许多免疫细胞（如巨噬细胞、单核细胞、B细胞）表面表达Fcγ受体，能与抗体的Fc段结合，导致抗体“粘”在非目标细胞上，这是检测免疫细胞时产生大量假阳性的重要原因。因此需要在加入荧光抗体前，使用过量非特异性同源免疫球蛋白（如人用小鼠血清、人Fc阻断剂、商品化Fc阻断剂）或抗CD16/32抗体（针对小鼠样本）封闭样本的FC结合位点，降低因此产生的大量非特异性结合导致的假阳性。

四、抗体特异性不足

若流式抗体本身未经严格验证，特异性不足，可能会识别非目标抗原，那也会因此导致出现假阳性。因此，选择经过严格验证的特异性抗体对于实验尤为重要，尚恩生物采用国内外高分文献的克隆号抗体，抗体特异性、灵敏度、稳定性有据可查，从根源上保障实验的顺利进行，结果更可信。

五、荧光标记物结合

某些荧光染料（尤其是串联染料，如PE-Cy7、APC-Cy7）在光照或固定后易分解，产生游离的Cy染料，这些染料会非特异结合到任何蛋白上。因此在使用此类染料时应注意保存时间和温度，如果可能的话尽量避免使用这种染料。尚恩生物提供流式抗体配色服务，由深耕流式领域十余年的资深技术为您提供最佳流式抗体配色服务和实验指导，为您的实验保驾护航。

六、洗涤不充分

洗涤液配方、洗涤次数、时间等也会一定程度影响非特异性吸附的产生，通过增加洗涤次数、时间并使用合适的洗涤缓冲液，可以有效去除未结合的抗体，从而减少非特异性结合的影响。

七、死细胞影响

细胞死亡后会产生粘性物质，主要是泄露的DNA等物质可能吸附流式抗体导致假阳性。因此，在流式实验时尽量使用活性高的新鲜组织或样本，可以结合流式抗体荧光类型，选择合适的细胞死活染料（Live/Deaddye）在表面染色前进行标记，并在分析时将其排除。

▲SNK-028SUNNCELL?Violet510(死活染料)

八、固定破膜过程

部分细胞检测时，由于抗原存在于细胞内部，因此需要进行细胞固定和破膜以实现流式抗体进入细胞内部检测，但固定破膜过程会暴露细胞内部大量非靶标抗原，因此直接检测会经常出现背景升高的问题，因此大多会在破膜后使用含permeabilizationbuffer（如含saponin）的洗涤/孵育缓冲液，并在需要的情况下在破膜后增加一步封闭。

▲SNAR-004胞内因子固定破膜剂(即用型)

尚恩生物流式抗体产品采用国内外高分文献同样克隆号的抗体为原料，进口荧光染料通过优化工艺高效标记，有效保障了流式抗体特异性、灵敏度、稳定性、荧光强度等基础参数，实验结果可重复性、认可度都同时得到保障，实际使用效果不差于进口品牌的同类产品。同时，尚恩生物提供的不仅仅是流式抗体产品，相应的专业配色、实验操作、数据分析等全流程指导服务同步在线，有效保证实验的顺利进行。从产品到服务，尚恩生物均为您提供最佳选择，欢迎选购。