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紫外分光光度计原理与使用培训手册

引言

紫外分光光度计作为一种高精度的分析仪器，凭借其操作简便、灵敏度高、选择性好等特点，在化学、生物、医药、环境监测等诸多领域得到了广泛应用。它通过测量物质对紫外-可见区域特定波长光的吸收程度，实现对物质的定性鉴别、定量分析及结构推断。本手册旨在系统阐述紫外分光光度计的基本原理、仪器构造、操作流程、注意事项及日常维护保养知识，以期帮助操作人员规范使用仪器，确保分析结果的准确性与可靠性，充分发挥仪器的性能优势。

一、紫外分光光度法基本原理

1.1光的吸收与分子结构

光是一种电磁波，紫外光通常指波长在190nm至400nm之间的电磁波，可见光则在400nm至760nm之间。当一束光穿过物质时，物质的分子或原子会选择性地吸收特定波长的光能量，导致光的强度减弱。这种吸收特性与分子的电子结构密切相关，主要涉及分子中外层价电子的跃迁，如σ→σ*、n→σ*、π→π*以及n→π*跃迁等。不同的分子因其化学组成和结构的差异，对不同波长光的吸收能力各不相同，这构成了紫外分光光度法定性分析的基础。

1.2朗伯-比尔定律（Lambert-BeerLaw）

朗伯-比尔定律是紫外分光光度法定量分析的理论基石。该定律描述了物质对光的吸收程度与溶液浓度及液层厚度之间的定量关系。

其数学表达式为：

A=ε×c×l

其中：

*A为吸光度（Absorbance），无量纲，它表示物质对光的吸收程度，定义为入射光强度(I?)与透射光强度(I)比值的对数，即A=log(I?/I)。

*ε为摩尔吸光系数（Molarabsorptivity），单位为L/(mol·cm)，它是衡量物质在特定波长下吸收光能力的常数，与物质本性、入射光波长及温度等因素有关。

*c为溶液中吸光物质的摩尔浓度，单位为mol/L。

*l为光在溶液中经过的路径长度，即比色皿的厚度，单位为cm。

朗伯-比尔定律表明，在一定条件下，当一束平行单色光通过均匀的非散射稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质的浓度和液层厚度的乘积成正比。这意味着，只要我们知道了ε和l，通过测量A，就可以计算出溶液的浓度c；或者在已知c和l的情况下，通过A的变化来研究物质的特性。

二、仪器结构与核心部件

紫外分光光度计的型号繁多，但其基本结构和工作原理是相似的。通常由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理与显示系统等主要部分组成。

2.1光源（LightSource）

光源的作用是提供足够强度且稳定的连续光谱，覆盖仪器的工作波长范围。

*紫外区：常用氘灯（DeuteriumLamp），能发射190nm至400nm波长范围的连续光谱。

*可见区：常用钨灯或卤钨灯（TungstenHalogenLamp），能发射320nm至2500nm左右的连续光谱，在可见区（400nm-760nm）有较强输出。

现代仪器通常将氘灯和钨灯组合使用，通过切换或同时点亮来满足全波长范围的需求。光源的稳定性对测量结果的精密度至关重要。

2.2单色器（Monochromator）

单色器是仪器的核心部件之一，其功能是将光源发出的复合光分解为单色光，并能从中选出所需波长的光。它主要由入射狭缝、准直镜、色散元件（如棱镜或光栅）、聚焦镜和出射狭缝组成。

*入射狭缝：限制杂散光进入，控制光的入射量。

*准直镜：将来自狭缝的发散光变成平行光。

*色散元件：将平行复合光按波长顺序色散成光谱。光栅因其色散均匀、分辨率高等优点，在现代分光光度计中得到广泛应用。

*聚焦镜：将色散后的单色光聚焦到出射狭缝上。

*出射狭缝：截取特定波长的单色光，并控制其带宽（Bandwidth）。带宽越小，单色光纯度越高，但光强度也相应减弱。

样品室用于放置样品溶液的比色皿（Cuvette）。设计上应保证光路通过比色皿的中心，且避免外界杂散光的干扰。样品室通常配备有恒温装置接口或可更换的样品架，以适应不同测量需求（如微量样品、恒温反应等）。

2.4检测器（Detector）

检测器的作用是将透过样品的光信号转换为可测量的电信号。对检测器的要求是灵敏度高、响应速度快、线性范围宽，且对不同波长的光具有良好的响应特性。

*光电倍增管（PMT）：曾是紫外可见分光光度计中常用的检测器，具有极高的灵敏度和快速的响应时间，但在强光下易疲劳。

*光电二极管阵列（PDA）或电荷耦合器件（CCD）：属于多通道检测器，能够同时检测多个波长的光信号，使得光谱扫描速度大大提高，是现代快速扫描分光光度计的核心部件。

2.5信号处理与显示系统

检测器输出的微弱电信号经过放大器放大后，由A/D转换器转换为数字信号，送入微处理器（计算机）进行处理。仪器内置的软件可完成吸光度、透