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双光子控制小分子生物探针：原理、设计与前沿应用

一、引言

1.1研究背景与意义

在生物医学研究的微观世界里，成像技术无疑是科学家们洞察生命奥秘的“眼睛”。从早期的光学显微镜到如今的前沿成像手段，每一次技术的跃迁都为我们揭开了生命活动更精细、更深层的面纱。而生物探针作为成像技术中的关键角色，更是发挥着不可替代的作用。

生物探针是一类能够与生物体内特定目标分子发生特异性相互作用，并通过物理或化学信号变化来指示目标分子存在、位置、浓度及活性等信息的分子工具。在生命科学研究的各个领域，生物探针都有着广泛且重要的应用。例如在细胞生物学中，生物探针可用于标记细胞内的特定细胞器，如线粒体、溶酶体等，帮助研究人员清晰地观察细胞器的形态、分布及功能状态，深入了解细胞的生理过程；在神经科学领域，通过设计对神经递质、离子通道等具有特异性响应的生物探针，能够实时监测神经元活动，为揭示神经信号传导机制提供有力支持；在癌症研究方面，生物探针可以靶向肿瘤细胞表面的特异性标志物，实现对肿瘤细胞的早期检测、精准定位及动态追踪，有助于癌症的早期诊断与治疗效果评估。

传统的单光子激发荧光探针在生物医学成像中存在一定的局限性。单光子激发通常使用紫外-可见光作为激发光源，这种短波长的激发光在生物组织中穿透能力较弱，易受到组织的强烈散射和吸收，导致成像深度受限，一般只能对生物组织表面或浅层区域进行成像。而且，单光子激发需要较高的激发光强度，这容易引起荧光探针的光漂白现象，使荧光信号逐渐减弱甚至消失，同时也会对生物样本产生较大的光毒性，损害细胞的正常生理功能，影响长时间的动态观测。

为了克服传统单光子激发荧光探针的不足，双光子控制的小分子生物探针应运而生，它采用近红外光作为激发光源，利用双光子吸收过程实现对生物分子的探测。双光子吸收是指在极短的时间内，荧光分子同时吸收两个低能量（长波长）的光子，跃迁到激发态，随后释放一个高能量（短波长）的荧光光子返回基态。这一独特的激发方式赋予了双光子控制小分子生物探针诸多优势。首先，近红外光在生物组织中的散射和吸收明显低于紫外-可见光，具有较强的组织穿透能力，能够实现对深层组织的成像，成像深度可达毫米级，为研究生物体内深部结构和生理过程提供了可能。其次，双光子激发具有高度的空间局域性，只有在激光焦点附近极微小的区域内，光强足够高时才能发生双光子吸收，有效地抑制了背景荧光干扰，提高了成像的分辨率和对比度，可实现对生物分子的精确定位和定量分析。此外，双光子激发所需的总能量较低，光漂白和光毒性较小，适合对活细胞和组织进行长时间、高分辨率的动态成像，能够更真实地反映生物分子在生理状态下的动态变化过程。

双光子控制的小分子生物探针在深层组织成像方面的独特优势，使其在生物医学研究中具有重要的研究价值和广泛的应用前景。它为研究生物体内复杂的生理和病理过程提供了一种强大的工具，有助于深入理解生命现象的本质，推动生物医学科学的发展。在疾病诊断领域，双光子控制小分子生物探针能够实现对疾病相关生物标志物的高灵敏检测和成像，为疾病的早期诊断和精准诊断提供新的技术手段；在药物研发方面，可用于监测药物在体内的分布、代谢及与靶点的相互作用，加速药物研发进程，提高研发效率；在神经科学研究中，能够实时观测神经元的活动和神经信号的传递，为攻克神经系统疾病提供关键的研究数据。

1.2国内外研究现状

在国外，双光子控制小分子生物探针的研究起步较早，众多科研团队在该领域取得了一系列具有重要影响力的成果。例如，美国斯坦福大学的科研团队开发了一种基于荧光共振能量转移（FRET）机制的双光子小分子探针，用于检测细胞内的活性氧（ROS）。该探针通过巧妙的分子设计，将荧光供体和受体连接在特定的识别基团上，当与ROS发生特异性反应时，分子构象发生变化，导致荧光供体和受体之间的距离改变，从而引起荧光共振能量转移效率的变化，实现对ROS的高灵敏度检测。实验结果表明，该探针能够在活细胞内准确地检测到ROS的动态变化，为研究氧化应激相关的生理和病理过程提供了有力的工具。

德国哥廷根大学的研究人员则致力于开发用于生物硫醇检测的双光子小分子探针。他们设计合成了一种以萘二甲酰亚胺为荧光团，以二硫键为识别基团的探针。在生理条件下，探针的荧光被淬灭，当遇到生物硫醇时，二硫键被还原，荧光团与识别基团分离，荧光得以恢复。利用这一原理，该探针实现了对细胞和组织中生物硫醇的高选择性和高灵敏度成像，成功应用于神经退行性疾病模型中生物硫醇水平变化的研究。

国内的科研团队在双光子控制小分子生物探针领域也展现出了强劲的研究实力，取得了许多令人瞩目的成果。厦门大学柔性电子（未来技术）研究院的黄维、李林教授、潘思骏副教授团队与新加坡国立大学HuilinShao教授合作