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农杆菌介导GNA基因转化禾本科草坪草：机制、实践与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

随着城市化进程的加速，人们对生活环境质量的要求日益提高，绿化在城市建设中的重要性愈发凸显。禾本科草坪草作为城市绿化、运动场建设以及生态环境保护的重要组成部分，具有保持水土、调节气候、净化空气和美化环境等多种功能，在现代景观中占据着不可或缺的地位。然而，在实际应用中，禾本科草坪草常受到病虫害、杂草以及恶劣环境条件的威胁，导致草坪质量下降、景观效果受损，甚至需要频繁更换草坪，增加了养护成本和资源浪费。传统的育种方法虽然在一定程度上改良了草坪草的某些性状，但存在周期长、可利用遗传资源有限以及难以同时兼顾多个优良性状等局限性，已难以满足现代草坪业对高品质、多抗性草坪草品种的需求。

遗传转化技术作为现代生物技术的重要组成部分，为禾本科草坪草的遗传改良提供了新的途径。通过遗传转化，能够将外源基因导入草坪草细胞中，使其获得原本不具备的优良性状，如抗虫、抗病、抗逆等，从而培育出具有更强适应性和观赏性的草坪草新品种。这种精准的基因操作方式克服了传统育种方法的盲目性和局限性，极大地拓宽了草坪草遗传改良的范围和潜力，为解决草坪草在实际应用中面临的问题提供了有力的技术支持。

雪花莲凝集素（Galanthusnivalisagglutinin，GNA）基因是植物抗虫基因工程中应用较为广泛的基因之一。GNA蛋白能够特异性地结合昆虫消化道上皮细胞表面的糖蛋白受体，干扰昆虫的消化和吸收功能，对蚜虫、飞虱、叶蝉、粉虱等刺吸式害虫以及线虫具有强烈的毒性，可有效抑制害虫的生长发育和繁殖，同时对高等动物安全，不会对生态环境造成负面影响。将GNA基因导入禾本科草坪草中，有望赋予草坪草良好的抗虫特性，减少化学杀虫剂的使用，降低对环境的污染，保护生态平衡，同时提高草坪草的抗虫能力，延长草坪的使用寿命，降低养护成本，具有重要的经济和生态意义。

农杆菌介导的遗传转化方法是目前应用最为广泛的植物遗传转化技术之一。该方法具有操作简单、成本较低、转化效率较高、导入的外源基因拷贝数低且整合位点较为稳定、遗传稳定性好等优点，能够有效地将外源基因导入植物细胞并整合到植物基因组中，实现稳定表达。与其他遗传转化方法相比，农杆菌介导法更适合禾本科草坪草的遗传转化，为GNA基因在草坪草中的导入和表达提供了可靠的技术手段。因此，开展农杆菌介导的GNA基因对禾本科草坪草的遗传转化研究，对于培育具有抗虫特性的新型禾本科草坪草品种，推动草坪业的可持续发展具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

自20世纪80年代以来，农杆菌介导的遗传转化技术在植物基因工程领域得到了广泛的应用和深入的研究。最初，该技术主要应用于双子叶植物的遗传转化，并取得了显著的成果，如烟草、番茄、马铃薯等植物的转基因研究。随着研究的不断深入，科研人员逐渐探索将农杆菌介导法应用于单子叶植物，尤其是禾本科植物的遗传转化。早期，由于禾本科植物被认为不是农杆菌的天然宿主，其遗传转化面临诸多困难，转化效率较低。然而，通过对农杆菌菌株、载体系统、转化条件以及外植体类型等方面的不断优化和改进，农杆菌介导的禾本科植物遗传转化取得了一系列重要进展。如今，在水稻、小麦、玉米等重要禾本科粮食作物上，农杆菌介导的遗传转化技术已相对成熟，并成功获得了许多具有优良性状的转基因植株。

在草坪草遗传转化研究方面，国内外学者也开展了大量工作。早期主要集中在建立草坪草的植株再生体系，通过愈伤组织培养、悬浮细胞培养、原生质体培养等手段，对早熟禾属、黑麦草属、结缕草属和剪股颖属等一些草坪草物种建立了较为完善的植株再生体系。在此基础上，利用电激法、硅碳纤维法、PEG法和基因枪法等遗传转化方法，在上述各属的一些物种上成功建立了遗传转化体系并获得了转基因植株。然而，这些传统转化方法存在转化效率低、外源基因整合不稳定、易造成基因沉默等问题。近年来，农杆菌介导的草坪草遗传转化逐渐受到关注，研究人员通过优化转化条件，如选择合适的农杆菌菌株、载体构建、外植体类型和预处理方法、共培养条件等，在提高草坪草转化效率方面取得了一定的突破。例如，通过对农杆菌菌株的改造和载体元件的优化，增强了农杆菌对草坪草细胞的侵染能力和外源基因的表达水平；采用化学试剂或物理方法对草坪草外植体进行预处理，提高了外植体对农杆菌的敏感性；精细调整共培养温度、时间和培养基成分，为农杆菌与草坪草细胞的相互作用和T-DNA的转移提供了更适宜的环境。

GNA基因在植物抗虫基因工程中的应用研究也取得了丰硕的成果。在农作物方面，转GNA基因的小麦、水稻、大豆等已经在国内外较为广泛地进行了种植，田间试验表明这些转基因作物对刺吸式害虫具有明显的抗性，能够有效减少害虫的侵害，提高作物产量