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黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

文件编码：

2015年3月

黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

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QC室主管年月日

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--质量负责人年月日

黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

目录

1目的1

2菌种1

3试验环境与器材1

4试验过程1

5可接受标准1

6贮存期判断1

7分析与结论1

黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

黑曲霉孢子悬液贮存有效期确认

一、目的

黑曲霉是2010版和2015版药典收载的试验用菌株，用于微生物限度检查和无

菌检查的方法验证、培养基适用性检查、抑菌效力检查等。俩版药典均明确规定，

稳定的黑曲霉孢子悬液在2~8℃中保存可在验证过的贮存有效期内可以直接稀释使

用。为确定我公司微生物实验室制备的黑曲霉孢子悬液在贮存期内质量符合要求，

进行黑曲霉孢子悬液贮存期确认。

二、菌种

菌种名称：黑曲霉[CMCC(F)98003]

编号：98003-2

来源：由中国药品生物制品检定所提供冻干粉（0代）传代分装的二代孢子悬液（-70℃保存）

制得的工作菌种。

传代次数：2代

三.试验环境与器材

1、测试环境条件

所有检查均在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的垂直单向流空气区域

内（安全柜）进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。

2、培养基

改良马丁琼脂培养基、改良马丁培养基、玫瑰红钠琼脂由北京三药科技开发公司

生产提供；

3、试剂

含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液

四、试验过程

1、接种黑曲霉的新鲜培养物（工作菌种）至3支改良马丁琼脂斜面培养基上，23～

28℃培养5~7天。

2、取3支经23～28℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，分别加4ml含0.05%（ml/ml）

聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后采用适合的方法吸取出孢

子悬液1ml至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶

-3-4-5

液稀释至10、10、10，每个稀释级别取1ml菌液加入无菌平皿，立即倾注冷却

至45℃左右的玫瑰红钠琼脂培养基，每个稀释级别平行制备2个平皿，混匀，凝固，

置23～28℃培养72h计数。使用完的3支斜面的稀释液置2~8℃冰箱中保存。计数

结果见表1。

黑曲霉孢子悬液贮存有