高中生物选修3知识点总结.docVIP

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中

生

物

选

修

3

知

识

点

总

结

班级：___＿___＿___＿_

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专题1???基因工程

基因工程的概念?：

基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计,经过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特征,发明出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNＡ分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNＡ重组技术。?

基因工程的原理：基因重组

（一)基因工程的基本工具?

1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶)?

(１）起源:重要是从原核生物中分离纯化出来的。?

(2)功效：可以识别双链ＤNA分子的某种特定的核苷酸序列,而且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,所以具备专一性。?

(3)成果:经限制酶切割产生的ＤNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶?

(1）两种DNA连接酶(Ｅ·coliＤＮA连接酶和T４-DNA连接酶）的比较:

?①相同点:都缝合磷酸二酯键。?

②区别:E·coliＤＮＡ连接酶起源于大肠杆菌，只能将双链ＤNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4ＤNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。?

（2)与DNＡ聚合酶作用的异同:?

ＤNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DＮA连接酶是连接两个ＤNA片段的末端，形成磷酸二酯键。?

??DＮＡ连接酶

?DNＡ聚合酶

不一样点

连接的ＤＮA

双链

单链

模板?

不要模板

要模板

连接的对象

2个DNA片段?

单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上

相同点

作用实质

形成磷酸二酯键

化学本质

蛋白质

３.“分子运送车”——载体?

(1）载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。?

②具备一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

?③具备标记基因,供重组ＤNA的鉴定和选择。

?(2）最常用的载体是质粒,它是一个裸露的、结构简朴的、独立于细菌染色体之外,并具备自我复制能力的双链环状DNＡ分子。?

（3）其它载体:λ噬菌体的衍生物、动植物病毒??

(二)基因工程的基本操作程序?

第一步：目标基因的获取?

1．目标基因是指：?编码蛋白质的结构基因?。?

2.原核基因采取直接分离取得,真核基因是人工合成。人工合成目标基因的常用方法有反转录法_和化学合成法＿。?

3.ＰCＲ技术扩增目标基因?

(1)PCＲ的含义:是一项在生物体外复制特定DＮA片段的核酸合成技术。?

（2)目标:获取大量的目标基因?

(3)原理：DNA双链复制?

(4）过程：第一步:加热至90～9５℃DNA解链为单链；?

第二步:冷却到55~60℃,引物与两条单链DNA结合;?

第三步:加热至70～７5℃，热稳定ＤNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。

（５)特点:指数(2n)形式扩增?

第二步：基因体现载体的构建(关键）?

1.目标：使目标基因在受体细胞中稳定存在，而且可以遗传至下一代,使目标基因可以体现和发挥作用。

?２.构成:目标基因＋开启子+终结子+标记基因?

(1）开启子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端，是RＮA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终取得所需的蛋白质。?

（2)终结子：也是一段有特殊结构的DNA片段?，位于基因的尾端。

（３)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目标基因，从而将含有目标基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。?

第三步:将目标基因导入受体细胞_?

1.转化的概念：是目标基因进入受体细胞内,而且在受体细胞内维持稳定和体现的过程。?

２．常用的转化方法：?

将目标基因导入植物细胞：采取最多的方法是?农杆菌转化法，其次还有?基因枪法和?花粉管通道法等。?

将目标基因导入动物细胞：最常用的方法是?显微注射技术。方法的受体细胞多是?受精卵。?

将目标基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的因素是?繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少?，最常用的原核细胞是?大肠杆菌?,其转化方法是:先用?Ca2＋?解决细胞，使其成为?感受态细胞?,再将?重组体现载体DＮA分子?溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收ＤＮA分子，完成转化过程。?

3．重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因体现载体受体细胞的依据是标记基因是否体现。?

第四步:目标基因的检测和体现?

１．一方面要检测转基因生物的染色体ＤNA上是否插入了目标基因,方法是采取DNＡ分子杂交(DNA-DNA)技术。?

2.其次还要检测目标基因是否转录出mＲNA，方法是采取分子杂交(DNＡ-RNA)技术。?

３.最终检测目标基因是否翻译成蛋白质,方法是采取抗原—抗体杂交技术。

?4.有时还