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无菌技术的基本原则

第一章无菌技术的重要性与定义无菌药品的生产必须最大限度地降低微生物、微粒和热原污染的风险。无菌并非绝对概念,而是基于概率意义上的无菌保证水平(SterilityAssuranceLevel,SAL),通常要求达到10??的污染概率。微生物控制通过环境控制、灭菌工艺和无菌操作,将微生物污染降至最低水平,确保产品符合药典标准。微粒管理严格控制生产环境中的悬浮粒子数量和粒径分布,防止可见异物和不溶性微粒污染药品。热原防控采用去热原工艺和严格的清洁程序,消除细菌内毒素等热原物质,保障注射剂安全性。

无菌药品的分类最终灭菌产品这类产品在生产过程结束后,通过湿热灭菌、干热灭菌或辐射灭菌等物理方法进行最终灭菌处理。灭菌工艺经过充分验证,能够达到无菌保证水平的要求。大容量注射液小容量注射液部分粉针剂非最终灭菌产品由于产品或包装材料对热敏感或其他原因无法进行最终灭菌,需要在整个生产过程中或部分关键工序采用无菌生产工艺,对环境和操作要求更为严格。生物制品热敏感药物眼用制剂冻干粉针剂

第二章洁净区设计与分级洁净区是无菌生产的核心区域,根据操作风险和空气质量要求分为A、B、C、D四个等级。每个等级都有明确的悬浮粒子、微生物和环境参数控制标准。01A级洁净区高风险操作区,采用单向流(层流)风系统,风速0.36-0.54m/s,用于灌装、分装、敞口容器操作等关键工序。02B级洁净区A级区的背景环境,通常采用紊流系统,为A级区提供保护,防止外部污染进入高风险操作区域。03C级洁净区中等风险操作区,用于配液、过滤等工序,空气质量要求相对较低,但仍需严格控制。04D级洁净区低风险操作区,用于物料准备、清洗等辅助工序,是洁净生产的外围保护区域。

洁净区空气悬浮粒子标准空气悬浮粒子是衡量洁净区空气质量的关键指标。根据ISO14644-1标准,不同洁净级别对≥0.5μm和≥5.0μm粒子数有严格限制,分为静态和动态两种测试状态。≥0.5μm动态(个/m3)≥5.0μm动态(个/m3)静态测试在洁净区已完成安装、设备运行但无人员活动的状态下进行测试,评估环境本底水平。动态测试在正常生产状态下,包括人员和设备运行时进行测试,反映实际生产条件下的空气质量。A级区在关键操作时应持续监测悬浮粒子,确保空气质量始终符合标准要求。

单向流洁净工作台单向流(层流)系统是A级洁净区的核心技术,通过高效过滤器(HEPA或ULPA)将洁净空气以均匀的速度和方向送入工作区,形成活塞流效果,快速带走污染物。空气过滤高效过滤器去除≥0.3μm粒子,效率≥99.97%均匀送风风速0.36-0.54m/s,气流平行单向流动污染防护快速排除操作产生的微粒和微生物

第三章无菌操作环境的监测环境监测是验证洁净区控制有效性的关键手段。监测项目包括悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物、温湿度、压差等,需建立完善的监测计划和超标处理程序。悬浮粒子监测A级区关键操作全过程连续监测,B/C/D级区定期监测,使用在线或便携式粒子计数器。微生物监测包括空气浮游菌(主动采样)、沉降菌(被动采样)及表面微生物(接触碟或棉签),评估无菌控制效果。超标处理监测结果超标时立即启动调查程序,分析原因,采取纠偏措施,必要时暂停生产并重新验证。监测频率应基于风险评估确定,A级区每批次监测,B级区每周监测,C/D级区每月监测。趋势分析有助于及早发现潜在问题。

微生物监测标准不同洁净级别的微生物控制标准差异显著。A级区要求最严格,几乎不允许检出微生物;B级区允许极低水平;C/D级区标准逐级放宽但仍需严格控制。1A级浮游菌cfu/m3,沉降菌1cfu/4h,表面1cfu/碟10B级浮游菌cfu/m3,沉降菌5cfu/4h,表面5cfu/碟100C级浮游菌cfu/m3,沉降菌50cfu/4h,表面25cfu/碟200D级浮游菌cfu/m3,沉降菌100cfu/4h,表面50cfu/碟警戒限与纠偏限企业应根据历史数据设定警戒限(AlertLimit)和纠偏限(ActionLimit),警戒限触发调查,纠偏限触发立即纠正措施。培养条件浮游菌和沉降菌通常使用胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA),30-35℃培养不少于2天,20-25℃培养不少于3天。

第四章隔离操作技术隔离操作器(Isolator)为高污染风险操作提供物理隔离保护,将操作区域与外部环境完全隔离,通过手套进行操作,显著降低微生物污染风险。1密闭设计隔离器采用不锈钢或透明高分子材料制成,确保内外环境完全隔离,防止交叉污染。2空气质量控制内部维持正压或负压,配备高效过滤器,确保进入的空气达到A级洁净度标准。3灭菌消毒使用过氧化氢气体或其他灭菌剂对隔离器内部进行周期性灭菌,消除残留微生物。4完整性检测定期进行压力衰减试验或其他检漏方法,验证隔离器