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2026年生物技术研究员招聘面试题及答案

一、专业知识题（共5题，每题10分，总分50分）

1.题：简述CRISPR-Cas9技术在基因编辑中的原理及其在临床应用中的潜在挑战。

答案：

CRISPR-Cas9技术通过向导RNA（gRNA）识别并结合目标DNA序列，引导Cas9核酸酶在该位点进行切割，从而实现基因编辑。其原理包括：

-识别阶段：gRNA与目标DNA序列配对，形成RNA-DNA杂合体。

-切割阶段：Cas9蛋白在杂合体附近被激活，通过双链断裂（DSB）切割DNA。

-修复阶段：细胞通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）修复断裂，实现基因敲除或插入。

临床应用潜力：

-治疗遗传性疾病（如镰状细胞病、血友病）。

-肿瘤免疫治疗（如CAR-T细胞改造）。

-基因疗法（如通过体内递送修复缺陷基因）。

挑战：

-脱靶效应：gRNA可能误切非目标位点，导致副作用。

-递送效率：体内递送载体（如AAV、脂质体）需优化以提高靶向性。

-伦理争议：生殖系编辑可能引发遗传风险，需严格监管。

解析：

本题考察CRISPR技术的核心原理及其临床转化问题，需结合生物学机制与实际应用场景作答。

2.题：比较RNA干扰（RNAi）与CRISPR-Cas9在基因沉默中的差异，并举例说明其在药物研发中的应用。

答案：

差异：

-作用机制：

-RNAi通过小干扰RNA（siRNA）或miRNA降解/抑制目标mRNA，实现转录后调控。

-CRISPR-Cas9通过DNA双链断裂，直接编辑基因序列，效果更持久。

-特异性：RNAi依赖序列互补，CRISPR依赖gRNA精准靶向。

-应用场景：RNAi更适用于快速抑制蛋白表达，CRISPR可修正基因缺陷。

药物研发应用：

-RNAi药物：如Alnylam的Patisiran（治疗遗传性血色病）。

-CRISPR药物：如InnateDiagnostics的exa-cel（CAR-T疗法）。

解析：

需突出两种技术的分子机制差异，并结合药物案例说明其临床价值。

3.题：描述高通量筛选（HTS）在药物发现中的流程，并举例说明其局限性及改进策略。

答案：

HTS流程：

1.化合物库构建：筛选化合物库（如10^6-10^9分子）。

2.自动化检测：高通量打孔、加样、读板。

3.数据分析：筛选活性化合物，排除假阳性。

4.结构优化：通过分子动力学或计算机模拟优化。

局限性及改进：

-局限性：成本高、假阳性多、需优化筛选模型。

-改进策略：

-结合AI（如深度学习预测活性）。

-使用更灵敏的检测技术（如FRET）。

-分子印迹技术提高特异性。

解析：

需结合实验流程与实际挑战，体现技术发展趋势。

4.题：解释基因编辑中“脱靶效应”的成因，并列举三种降低脱靶风险的方法。

答案：

成因：

-gRNA与非目标序列高度相似，导致Cas9误切。

-碱基错配或gRNA二级结构干扰靶向。

降低风险的方法：

1.优化gRNA设计：选择低同源性序列。

2.筛选脱靶位点：通过测序验证（如NanoString）。

3.使用高保真Cas变体：如Cas9-HF1减少非特异性切割。

解析：

需结合分子机制提出解决方案，体现技术细节。

5.题：简述单细胞测序技术的原理及其在肿瘤异质性研究中的意义。

答案：

原理：

-通过分选单细胞，提取RNA/基因组，进行高通量测序。

-常见技术：10xGenomicsVisium（空间转录组）、scRNA-seq（单细胞RNA测序）。

意义：

-揭示肿瘤内不同亚群的基因表达差异。

-指导个性化治疗（如靶向特定亚群）。

解析：

需突出技术特点，并结合临床应用场景。

二、实验操作题（共4题，每题15分，总分60分）

6.题：设计一个实验验证某基因的敲低对细胞凋亡的影响，包括实验方案、对照组及数据统计分析方法。

答案：

实验方案：

1.细胞系：选择HeLa或K562细胞，构建shRNA慢病毒载体。

2.转染：感染细胞，筛选稳定敲低组（GFP筛选）。

3.凋亡检测：Caspase-3活性试剂盒（ELISA）、AnnexinV-FITC流式细胞术。

对照组：

-空载体对照组（排除载体干扰）。

-非靶向shRNA组（排除gRNA特异性）。

数据分析：

-t检验比较敲低组与对照组凋亡率差异。

-ROC曲线评估敲低效果。

解析：

需结合分子生物学实验设计，体现科学严谨性。

7.题：如何通过蛋白质印迹（WesternBlot）检测某蛋白在细胞治疗后的表达变化？

答案：

步骤：

1.细胞裂解：RIPA裂解液提取总蛋白，BCA定量。

2.电泳：SDS分离蛋白，转膜至