血管内皮祖细胞(EPC)与自体骨髓干细胞移植.pptVIP

首都医科大学血管外科研究所

首都医科大学宣武医院血管外科

;1997年Asahara等首先描述了循环于外周血中的内皮祖细胞（endothelialprogenitorcell，EPC）。

应用免疫磁珠法首先从外周血分离CD34+细胞，经在纤维连接蛋白（fibronectin,Fn）预衬的培养皿培养，这些细胞转变成内皮特征细胞。

意义：

（1）更正并充实了长期以来人们所认识的血管新生机制

（2）为缺血性疾病及恶性肿瘤的治疗提供了新的靶点;概念

EPC又称为血管母细胞/成血管细胞（angioblast）,是指能分化为血管内皮细胞的前体细胞，包括从血液血管干细胞(hemangioblast)到成熟内皮细胞之间的多个阶段的细胞。

换句话说，EPC是向成熟内皮细胞分化过程中的具有特殊表型和特性的过渡细胞群体。

;来源（一）

普遍认为内皮细胞系与造血细胞系共同来源于中胚层的一种共同祖先细胞——血液血管干细胞

(1)胚胎发育上的时空联系：在鼠胚7.5日龄、人胚13日龄胚外造血启动，卵黄囊的胚外中胚层聚集成血岛（bloodisland）。位于血岛外层的细胞分化成原始的血管内皮细胞，血岛中央的细胞则变成原始的造血细胞。多个血岛腔隙相互联结成网状结构，形成原始血管床，此过程称之为血管发生(vasculogenesis)。

(2)造血细胞与血管内皮细胞共同具有众多细胞表面标记：SCL/TAL-1、CD34、VEGFR-2、GATA-2、PECAM-1、Tie-1、Tie-2和CD133等。

(3)某些胚胎源细胞的双系分化能力：有人用VE-cadherin从胚胎中分离到不表达CD45和Ter119的“内皮细胞”，发现该细胞可产生包括T和B淋巴细胞在内的造血细胞，证明了胚胎期内皮细胞系与造血细胞系的同源性。同时有实验表明，小鼠、鹌鹑、鸡的胚胎干细胞、Flk-1+细胞、Tie-2+细胞及VE-cadherin+细胞在不同生长因子刺激下可同时产生造血和内皮系细胞;;图1EPC的来源，AB代表angioblasts;分子标记及生物学特性

从形态特征上不能与成熟血管内皮细胞区别

近年来发现CD133在EPC表达而在成熟血管内皮细胞则无表达

一般认为，早期EPC的三个表面标志性抗原：CD133、CD34和内皮细胞生长因子受体-2（VEGFR-2）,后者在人类称KDR,在鼠类称flk-1;分子标记及生物学特性

骨髓中的早期EPC尚不表达VE-cadherin和vW因子，在成体外周血中发现的EPC是较成熟的EPC，基本失去了CD133抗原但仍保留CD34和VEGFR-2阳性，外周血的EPC还以不同强度表达内皮系的其他标志分子：CD31、CD146、VE-cadherin、vW因子和内皮型NO合成酶等，成熟的血管内皮细胞（EC）则高表达VEGFR-2、VE-cadherin和vW因子

CD133抗原的丢失标志着外周循环中的EPC在向着成熟EC转化;较高的数量和迟发的高增殖潜能

实验证明，外周循环中成熟的EC数量极少，约2.6±1.6（2-3）个/ml，而EPC则约500-1000个/ml，两者比较相差悬殊

成熟微血管内皮细胞在体外能很快进入增殖期，但4-6周（8-10代）后增殖活力即逐渐下降。与此相反，外周血、胎肝、骨髓来源的CD34+细胞在15-20天后形成迅速生长的鹅卵石样内皮细胞层，并能稳定传代30次以上，其增殖潜能是脐静脉内皮细胞的10倍。Lin等发现骨髓来源的EPC与EC体外扩增能力之比为50:1。;动员

不同祖系的细胞由骨髓释放到外周血称为动员

许多生长因子、酶、配基及表面受体调节EPC的动员

基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的活化可能是动员的第一步

其他促使动员的信号尚不清楚，但至少包括来自外周的促血管生长因素

明显的例子包括肢体缺血、血管损伤、烧伤和冠脉旁路术后循环中EPC数量的迅速增加，这些事件都与内源性VEGF水平的增高有关;分离

EPC可从脐带血及成体外周血、胎肝、骨髓中获取

目前，分离EPC的方法主要有以下两种

（1）根据EPC表型用免疫磁珠法获得。先用Ficoll液密度梯度离心获取单个核细胞，然后用标记有相应细胞表面抗体的免疫磁珠将单个核细胞中的带有特定表面抗原的EPC筛选出来，一般选用CD34和/或CD133免疫磁珠

（2）贴壁法特定培养基分化分离EPC。通过密度梯度离心得到单个核细胞后，把这些细胞接种在表面涂有胞外基质（主要用Fn）培养容器里，使用添加有特殊生长因子的培养基培养。这些特殊的促生长因子有VEGF、干细胞生长因子（SCGF）、牛脑提取物以及复加bFGF、IGF、EGF、ascorbicacid的