水稻植株可溶性总糖及淀粉的测定.pdfVIP

史培华测试版2013留存

水稻植株可溶性总糖测定

一、器材准备：

25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器2个。

二、实验过程：

1、提取：称样0.1（0.0991-0.1009）克，加8ml浓度为80%的乙醇于10ml离

心管中，搅拌。80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液于25ml

容量瓶中，加8ml（可适量降低ml数，以防润洗过量，后期定容时已超过刻度

线）80%乙醇，80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液，共提取

三次。定容25ml。

2、测定：吸出提取液0.1ml于25ml刻度管，加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15

分钟，冷水浴冷却后，可使用分光光度计或酶标仪在620nm下比色，切记比色

的溶液冷却后要摇匀。

三、溶液配制：

蒽酮硫酸溶液：150毫克蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加入30ml水中，）；

建议使用500ml98%的硫酸加入197.5ml蒸馏水，散热到手可触碰时及时加入

0.9868g的蒽酮。

80%的酒精：8瓶500ml的酒精中加入1L蒸馏水，摇匀。

四、标准曲线制定

葡萄糖105℃6小时烘干，称取0.2g溶于1L蒸馏水，即为200ppm（μg/ml），

移液枪吸取溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml于25ml刻度管，加水1、0.9、

0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，即各溶液补齐到均为1ml，由此各刻度管中溶液的葡

萄糖浓度分别为：0、20、40、80、120、160、200μg/ml；加5ml硫酸蒽酮溶

液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后在620nm下比色。建议三次重复！！！每个

浓度下3个重复的OD值求平均值，而后以横坐标为葡萄糖浓度梯度，纵坐标

2

为OD值绘制标准曲线，一般线性拟合后R可达0.99以上。

五、计算方法

6

可溶性总糖含量（%）=[(C*V/A)/(W*10)]*100

C—从标准曲线查得的糖量（μg）V—样品提取液的总体积（ml）

6

A—显色时取用的样液量（ml）W—样品干重（g）10—g变μg

100—计算的是百分比%

可溶性总糖%=[C*25/0.1/(m*1000000)]*100

NETCIA实验室的记忆

史培华测试版2013留存

（测可溶性总糖后）总淀粉（非结构性碳水化合物）的测定

一、器材准备：

25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器3个

二、实验过程：

1、提取：将测糖剩余的样品在烘箱里烘干（或在80℃水浴锅中加热），待样品

中的酒精散去。加2ml水，100℃水浴15min，冰水浴冷却后加9.2N高氯酸2ml，

不时搅拌，静置反应15min，再加水4ml，3000转离心10min，上清液转移至

25ml容量瓶，转移时用蒸馏水润洗。再加2ml4.6N高氯酸，不时搅拌，100℃

水浴15min再加6ml水，3000转离心10min，上清液转移至25ml容量瓶。加

8ml（看润洗情况可适量减少ml数，以防超过25ml的刻度线）水清洗溶液，

搅拌，3000转离心10min，上清液转移至25ml容量瓶。共提取三次，定容25ml。

2、测定：吸出提取液0.1ml于25ml刻度管，加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15

分钟，冷水浴冷却后，可使用分光光度计或酶标仪在620nm下比色，切记比色

的溶液冷却后要摇匀。

三、溶液配制：

蒽酮硫酸溶液：150毫克蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加入30ml