层析填料Capto MMC的使用说明.pdfVIP

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CaptoMMC

皇家药院

CaptorMMC是一种耐盐的多模式的生物处理媒介，在使用填充床色谱法

从大量的培养液中纯化蛋白质时可以作为捕获介质和中间纯化介质。Capto

MMC在提高生产力的同时降低了生产成本：在高电导率下具有很高的动态载

量；高容量的吞吐量；新的选择性；更小的操作单元。

1生物处理媒介

生物处理媒介因为生产规模的色谱层析而得到发展。所有的生物处理媒介均

经验证方法进行生产，并且经过测试以满足生产的需求。安全的订购和交付模式

能够为规模生产需要的媒介提供可靠的供应。法规支持文件(RSF)可用来协助工

艺验证和提交给监管机构。生物处理媒介可以覆盖从捕获到精纯的所有纯化步

骤。

2CaptoMMC的特性

CaptoMMC具有多种官能团的配体，多种作用方式的官能团使配体具有

不同于传统离子交换剂的选择性，且在高盐条件下仍具有结合蛋白质的活性。

CaptoMMC与大分子间存在多种作用方式，其中最显著就是离子作用，

氢键和疏水作用。

CaptoMMC是为了提高介质在捕获和中间纯化步骤中的速度和通量而

设计的。通过提高高盐浓度下的容量和低反压条件下的流速，而减短生产周期和

提供生产力。

该媒介以高流速的琼脂糖为基质，典型的大规模柱子(直径为1m，柱床高

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度为20cm)在顶板压力低于3bar时流速为600cm/h或者更高。高交联度的琼

脂糖基质提供了很高的物理和化学稳定性。容量、洗脱行为和压力/流速等特性

不受层析过程常用溶液的影响。

CaptoMMC和琼脂糖6快速的压力-流速特性比较，工作条件

3方法设计和优化

设计和优化生物大分子分离方法的目的是确定实验条件，在尽可能短的时间

和尽可能高的产品回收率的条件下提高目的分子的最大吸附量。

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在结合蛋白时，CaptoMMC的作用类似于弱阳离子交换剂。因为允许在高

电导率条件下吸附蛋白，所以可能不需要为了提高填料的结合能力而去筛选最优

化的加载电导率。然而加载电导率可能会影响吸附选择性。

CaptoMMC在高电导率条件下对蛋白的有效捕获的特性在许多情况下会

限制提高盐浓度以洗脱蛋白质的方法的使用。通常可以通过联合改变pH、缓冲

液浓度和洗脱盐而摸索到最优的洗脱条件。为了建立最优的洗脱方案，实验设计

是一种研究多种参数对蛋白回收率的影响的有效方法，实验设计方法的例子如应

用说明11-0035-48所述，或者可以应用最优化的梯度洗脱方法。

4建议的纯化方案

使培养液的pH比目标蛋白的等电点低0.5~2.0个pH。需要根据具体的目

标分子确定精确的pH。

使用与培养液相同pH的起始缓冲液平衡柱子；上样；用起始缓冲液洗去未

结合的样品；按照以下方式洗脱目标蛋白：

4.1通过使用低于目标蛋白等电点0.5、1.5、2.5个pH的缓冲液或者使用pH

梯度缓冲液筛选最优洗脱pH。如果需要可以将目标蛋白开始洗脱的pH作为基

础进行优化。

4.2在步骤1确定的pH条件下，使用0.5、1.0、1.5M的盐溶液筛选洗脱的盐

浓度。

4.3如果需要进一步优化，可以提高缓冲盐的浓度，如从50Mm~250mM。

4.4如果目标蛋白仍然以级分的不对称峰洗脱，可以更换洗脱盐，如NaCl改为

NHCL。

4

4.5尿素和有机修饰剂等添加剂某些蛋白的回收率。

5通量的优化

优化方案主要需要考虑产品回收率和吞吐量之间的关系。使用实际给料过程

的前沿分析检测对目标蛋白的动态结合能力。由于在样本应用程序中，动态结合

能力是流速的函数，突破能力必须通过各种不同的停留时间来定义（流速），以

显示最佳的吞吐量水平。

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