寡核苷酸介导三链结构对c-fos原癌基因转录调控研究.pdfVIP

c‑fos原癌的转录可以通过寡核苷酸介导的

三链结构在体外形成来调节

严拉夫1,・A・斯托尔茨1,瓦伦丁・V・弗拉索夫2和纳德・G・阿布拉罕1

2

1纽约大学，俄罗斯新西伯利亚生物有机化学，新

西伯利亚

(收稿日期：/)‑EJB952063/1

c‑fos启动子的一个同嘌呤⋅同嘧啶序列被选作三链寡核苷酸的目标。显示了八种

长度在14到31个碱基对之间的寡核苷酸可以与c‑fos启动子区域内的三个

序列形成三链结构。还合成了带有5或3‑末端′′烷基化芳香2‑氯乙氨团

的同嘧啶寡核苷酸的反应性衍生物。根据寡核苷酸复合物的性质，得出

结论认为寡核苷酸与双链结合位点形成了共线三链结构。我们详细研究了使用电

泳迁移率和保护方法，这种寡核苷酸⋅复合物是否有助于设计针对小鼠

c‑fos中自然序列的高亲和力探针。我们的结果表明，c‑fos启动子区域

内的四个不同靶标可以以序列特异性方式与合成寡核苷酸形成三链结构。此

外，在cAMP/cAMP反应元件结合位点和fos结合位点3/激活蛋白‑2样（

FBS3/AP‑2样）位点前−83处，通过三链形成寡核苷酸修饰视网膜母细胞瘤

产物结合位点，以及在−431处的修饰，可导致内皮细胞中fos‑氯霉素乙酰转移

酶活性的显著抑制。这些结果为开发特定寡核苷酸靶标形成三链‑复合物

了基础，并强调了作为控制表达和细胞增殖基础的三链形成靶标的重要性。

：c‑fos；三链；启动子；转录因子；调控。

分子间三链结构的形成了实现精确序列识别的机会，并在治疗中具

有潜在用途[1,2]。首次了在二价阳离子存在下，两条多聚尿苷酸链和一条多

聚腺苷酸链之间形成特定复合物的情况是在1957[3]。的研究通过多种技术揭

示了短分子间三链结构的位点特异性形成，这些技术包括不同类型的分析、

亲和力切割和核磁[4‑11]。化学和表明，第三条链的核苷酸碱基占据

了克里克目标双链的主要沟槽[12,13]。中的三链结构是由于克里克

双链中同嘌呤链的碱基与额外的第三条链之间的特定胡格斯特型或

c-fosprotooncogenetranscriptioncanbemodulated

byoligonucleotide-mediatedformationoftriplex

structuresinvitro

YanLAVROVSKY1,RobertA.STOLTZ1,ValentinV.VLASSOV2andNaderG.ABRAHAM1

1TheRockefellerUniversity,NewYork,USA

2NovosibirskInstituteofBioorganicChemistry,Novosibirsk,Russia

(Received15December1995/15March1996)-EJB952063/1

Ahomopurine⋅homopyrimidinesequenceofthec-fospromoterwaschosenasatarget

foratriplehelixoligonucleotide.Eightoligonucleotidesthatrangedfrom14to31

bpwereshowntoformatriplehelixwiththreesequenceswithinthec-fospromoter