病毒感染的检查方法和防治原则培训课件.pptVIP

内容;第一节病毒感染的诊断

（Diagnosisofviralinfection）;一、标本采集与送检原则;二、检查方法;1.病毒形态学检查;呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片;Inclusionbody;2.病毒血清学检查;2.病毒血清学检查;HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达;ELISA;AIDS的确诊试验;3.病毒分子生物学检查;3.病毒分子生物学检查;4.病毒的分离培养与鉴定;病毒的分离培养方法：;⑴动物接种(animalinoculation);⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture);鸡胚接种部位：;优点：

易管理

不带微生物

成本较低

缺点：

操作程序复杂

目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒

;(3)细胞培养(cellculture);根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:

?原代培养细胞

?二倍体细胞株

?传代细胞系或株;①原代培养细胞（primaryculturalcells);①原代培养细胞（primaryculturalcells);特点:

?对多种病毒敏感

?生长能力有限,获取成本高

?可携带潜伏病毒

应用:

?病毒分离与鉴定

?病毒学实验研究

?不能用于制备疫苗;体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞;;4.病毒的分离培养与鉴定;病毒鉴定：;⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE);①CPE：病毒感染细胞发生形态改变;SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).;③CPE：形成包涵体（inclusionbody）;Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.;⑶干扰现象（interference）;4.病毒的分离培养与鉴定;病毒数量及感染性测定：;蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）;PLAQUEASSAY;PLAQUEASSAY;PLAQUEASSAY;分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞;用途：

?测定感染性病毒量

单位:PFU(plaqueformingunit)/ml

由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。

?分纯病毒;50%组织细胞感染量

(50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50);分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀释度的HCMV感染的HEL细胞;香港大学专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE→EM观察：冠状病毒

随后加拿大和美国CDC等SARS国际协作组的多个实验室也培养出了冠状病毒

利用‘免疫荧光法’将分离病毒与SARS患者血清进行血清学检测，反应呈阳性

从冠状病毒基因组的保守区设计引物，采用RT-PCR方法从培养上清中扩增出了冠状病毒基因→测序→经Genbank数据库同源性比对，发现同源性为64%左右;加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的同源性差异较大→确定为一种新的冠状病毒。

荷兰的病毒学家：用这种冠状病毒感染猴子→出现了与SARS病人相同的临床表现和病理特征→再次从动物学实验证实引起SARS的病原体是这种冠状病毒

WHO将其命名为SARS冠状病毒;电镜;谢谢大家！