T ／CITS 651—2025 分子克隆试剂盒质量评价技术规范.pdfVIP

ICS07.080

CCSA40

CITS

团体标准

T/CITS651—2025

分子克隆试剂盒质量评价技术规范

Technicalspecificationonqualityevaluationofmolecularcloningkit

2025-11-05发布2025-11-05实施

中国检验检测学会  发布

T/CITS651—2025

分子克隆试剂盒质量评价技术规范

1范围

本文件界定了分子克隆试剂盒质量评价的术语和定义，规定了质量评价指标、评价方法和评价结果

判定依据。

本文件适用于对市售或自制的分子克隆试剂盒进行质量评价。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

分子克隆molecularcloning

在体外对脱氧核糖核酸（DNA）分子按照既定的目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适

的受体细胞中，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得脱氧核糖核酸分子的大量拷贝，并使受体细胞获得新

的遗传特征。

[来源：GB/T44471—2024，4.41，有修改]

3.2

分子克隆试剂盒molecularcloningkit

将插入片段（常含有目的基因）与载体片段在体外连接，形成重组克隆载体的试剂盒，包括T4DNA

连接酶试剂盒、TA克隆试剂盒以及无缝克隆试剂盒。

3.3

连接效率ligationefficiency

DNA连接酶催化载体与插入片段末端之间通过磷酸二酯键共价连接或通过同源重组，形成正确重

组DNA分子的催化能力。

3.4

阳性率positiverate

经鉴定确认含有正确插入目的基因的重组克隆数占总筛选克隆数的百分比。

3.5

稳定性stability

在规定的储存条件和运输条件下，试剂盒在有效期内维持各组分理化性质、生物活性以及功能完整

性的能力。

4评价指标

4.1核酸纯度

核酸纯度包括载体片段和插入片段DNA的纯度。

4.2连接效率

试剂盒将载体片段与插入片段DNA共价连接或同源重组形成一个完整重组子的有效能力，通常以

转化效率来间接衡量。

1

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4.3克隆阳性率

克隆阳性率直接反映了连接和转化的效率，是衡量试剂盒核心性能的关键指标。

4.4稳定性

包括以下两种方法：

a)效期稳定性：反映了试剂盒性能随时间推移保持稳定的能力；

b)加速稳定性：通过模拟极端条件，预测了产品在常规储存期限内的质量衰减趋势。

1

注：加速稳定性不能直接用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。

2ab

注：根据产品特性选择）、）方法的任意组合，但所选用方法应经过验证，能有效证明产品在有效期内性能符合

标准要求。

4.5批间差异

在标准试验条件下，同一生产厂商生产的不同批次试剂盒的克隆阳性率的批间一致性。

4.6灵敏度

在标准试验条件下，试剂盒能够成功实现阳性克隆的最低载体片段输入量。

4.7兼容性

试剂盒对不同来源、不同质量的载体片段和插入片段DNA或者使用不同感受态细胞的广泛适应能

力。