实验室菌种验收、传代与保藏作业指导书（全流程）.pdfVIP

实验室菌种验收、传代与保藏作业指导书（全

流程）

前言

在微生物检测、生物研究及相关质量控制实验室中，菌种是开展实验活动

的基础。规范、安全、可追溯的菌种管理，是保证实验数据准确、可靠、可重

复的首要前提。本作业指导书旨在为实验室提供一套系统、详细且具备可操作

性的菌种全生命周期管理方案，涵盖从标准菌株的验收、复苏、传代、培养、

保藏，到日常使用与管理、废弃处理的全流程，帮助实验人员建立标准化操作

习惯，有效控制菌种变异与污染风险。

第一部分：核心概念与职责

1.1定义：明确“三代同堂”的菌种体系

标准菌株：指由国内外权威菌种保藏中心（如CGMCC、ATCC等）提供

的，具备明确遗传学特征鉴定报告和可追溯编号的原始菌株。它是实验室所有

菌种的“源头”与“基准”。

传代用菌种：由标准菌株制备，并采用特定长期保存方法（如甘油小瓷珠

或冷冻干燥）进行固定保藏的菌种。它作为“母种库”，用于常规传代和制备

工作用菌种，以减少对原始标准菌株的操作。

工作用菌种：由标准菌株或传代用菌种接种至普通培养基（如营养琼脂斜

面）培养后获得的菌种。它是直接用于日常实验工作的“工具菌”。

菌种的“代”：定义非常关键。将菌种接种到一管新鲜培养基上并培养一

次，即称为传“一代”。所有菌种的传代次数必须严格记录和控制，不得超过

5代（从保藏中心获得的标准菌株记为第0代），以防止因过度传代导致菌种

发生变异、退化或污染，丧失其代表性。

1.2适用范围与职责

适用范围：本规程适用于实验室所有需进行验收、传代与保藏的微生物菌

种（细菌、真菌等）。

主要职责：明确由具备相应资质的检验员或实验员具体执行菌种的接收、

验收、复苏、传代、保藏、制备及日常管理工作，并负责相关记录的填写。

第二部分：操作流程详解

2.1标准菌株的来源与验收

原则：所有标准菌株必须来源明确，可追溯至获得认可的保藏中心。

1、来源确认：采购时应明确要求供应商提供菌种证书（COA），确保菌

株信息无误。

2、现场验收：

接收时检查包装是否完整无破损。

核对菌种名称、数量与订单是否一致。

立即在《菌种验收记录表》上登记菌株名称、保藏编号、数量、接收日

期、供应商等信息。

3、初始存放：验收合格后，立即将新购的标准菌株转移至-20℃或更低温

度的冰箱中冻存，以维持其活性。

2.2菌种的复苏与传代流程

菌种的复苏是将保藏状态的菌种恢复活力的关键步骤，操作需严格遵守无

菌规范。

通用操作与注意事项

所有无菌操作应在生物安全柜（BSC）或超净工作台中进行。

操作前准备好所有需要的已灭菌的培养基、工具（接种环、镊子等）和消

毒剂。

动作迅速而准确，尽量减少菌种暴露于非适宜环境的时间。

不同保存形式的复苏方法

冷冻干燥安瓿管：

1、清洁安瓿管外壁。

2、用砂轮在其顶部约1/3处划痕。

3、用灼烧的玻璃棒尖端（或镊子）触碰划痕处，利用热胀冷缩使顶部破

裂。

4、用无菌吸管吸取适量复苏液（如液体培养基或缓冲液）加入管内，溶解

菌粉。

5、将菌液转移至合适的固体或液体培养基中进行培养。

甘油小瓷珠冻存管：

1、取出冻存管，快速晃匀。

2、在无菌条件下拧开管盖，用灭菌接种环或镊子快速夹取一枚小瓷珠。

3、立即拧紧管盖并将冻存管放回原保存温度，避免温度反复波动。

4、将取出的瓷珠直接置于平板划线或投入液体培养基中培养。

斜面低温保存菌种：

1、将菌种斜面从4℃冰箱取出，室温平衡后移入生物安全柜。

2、采用标准无菌操作（过火、斜持试管）进行转接。用接种环刮取少量菌

苔，在新鲜斜面上由底部向上呈“之”字形划线接种。

3、接种后立即塞好塞子，旧菌种管按规定进行灭活处理。

2.3核心流程：从标准菌株到工作菌种的传代路径

理解代次传递是本规程的核心。下图清晰地展示了标准菌株（G0）如何通

过不同路径产生传代用菌种（G1-G4）和工作用菌种（W1-W5）。