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纯化水的微生物限度检查方法验证

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微生物限度检查方法验证

验证方案制定人：部门：日期：验证方案审核

人：部门：日期：验证方案批准人：

部门：日期：

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1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查

方法的验证，以确认所

采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。

2验证方案：

照《中国药典》2021版二部附录ⅪJ方法。2.1仪器与试药

2.1.2仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔

径0.45um,直径50mm）。2.1.3试药：

2.1.4培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。来源：北

京三药科技开发公司生产中国药品生物制品检定所监制2.1.5试液：生理盐水，pH7.0

氯化钠-蛋白胨缓冲液。

（均按照《中国药典》2021版二部附录ⅪH、J要求配制）

2.1.6对照菌株：大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、

枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98

003]。来源：广州药物研究中心2.2对照菌液的制备：

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分

别接种于15ml营养肉汤培养基内，于30～35℃培养18～24小时后，稀释至1：10～1：

10，，取1ml注入平皿中，注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置30～

35℃培养48h，进行活菌计数。取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于

改良的马丁琼脂培养基内，于25～28℃培养24～48小时后稀释至1：10～1：10，取1ml

注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养

72h，进行活菌计数。取黑曲霉的玫瑰红钠琼脂新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培

养基内斜面中，于25～28℃培养5～7天后，用3～5ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗脱。然后，

用管口带有无菌薄棉花的无菌吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%的无菌氯化钠溶液

稀释至1：10～1：10，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，

混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。2.3试验过程：

2.3.1供试液的制备：取原液作为供试液。2.3.2细菌、霉菌及酵母菌计数：

2.3.3试验组：取供试液1ml直接过滤，取适宜稀释级试验菌1ml（含菌量为50～

100cfu）加入到50mlpH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液中，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于

营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，每株试验菌制备1个平皿，按薄膜过滤法

测定其菌落数。

2.3.4供试品对照组：取供试液1ml，直接过滤，用50mlpH7.0的氯化钠-蛋白胨缓

冲液分两次冲洗，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，

每种培养基制备一张滤膜。2.3.5稀释剂对照组：以稀释剂代替供试品同试验组做法测

定其菌数。2.3.6菌液组：见对照菌液的制备。

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3验证数据：

样品名称：取样点：试验用量：

菌液组供试品对照菌种菌落数组菌落数菌种名称代数（cfu）（cfu）大肠埃希菌金

黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉试验组稀释剂