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大豆种质萌发期耐盐性鉴定技术规程

1范围

本规程规定了大豆种质萌发期耐盐性鉴定的术语和定义、鉴定材料与仪器设备、鉴定准备、鉴定方法、指标调查与测定、耐盐性评价、鉴定报告及档案管理等内容。

本规程适用于各类大豆种质资源（包括地方品种、育成品种、品系、野生大豆及其近缘种等）萌发期耐盐性的快速鉴定与分级，为大豆耐盐育种亲本筛选、耐盐种质资源挖掘及耐盐机制研究提供标准化技术依据，不适用于大豆幼苗期及成株期耐盐性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本规程必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本规程；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规程。

GB/T1.1—2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则

GB4404.2粮食作物种子第2部分：豆类

NY/T1209大豆生产技术规程

NY/T2312作物种质资源鉴定评价技术规范大豆

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

SL395农田土壤环境质量监测技术规范

3术语和定义

NY/T2312、GB/T3543.4界定的以及下列术语和定义适用于本规程。

3.1大豆种质

具有一定遗传特性、可供育种、研究或生产利用的大豆遗传材料，包括种子、植株、组织、细胞等，本规程特指大豆种子种质。

3.2萌发期

从大豆种子吸水膨胀开始，至胚根突破种皮（露白）并生长至种子长度的1/2、胚芽生长至种子长度的1/3为止的时期，一般为鉴定处理后3～7天。

3.3耐盐性

大豆种质在盐胁迫环境下，能够正常吸水、萌发、生长，维持自身生理代谢稳定，表现出抵御盐害、完成萌发过程的能力。

3.4盐胁迫浓度

鉴定过程中人为设置的、用于模拟盐碱环境的氯化钠（NaCl）溶液浓度，本规程根据大豆萌发期耐盐特性，设置梯度浓度用于区分不同种质的耐盐等级。

3.5发芽率

在规定的鉴定条件和时间内，正常萌发的种子数占供试种子总数的百分比，是衡量大豆种质萌发期耐盐性的核心指标之一。

3.6相对发芽率

盐胁迫条件下的发芽率与对照（蒸馏水）条件下发芽率的比值，用于消除不同大豆种质本身发芽能力差异对耐盐性鉴定结果的影响，更精准评价耐盐能力。

4鉴定材料与仪器设备

4.1鉴定材料

大豆种质种子：选用籽粒饱满、无破损、无霉变、无病虫害、大小均匀一致的种子，种子纯度≥98%、净度≥99%、发芽率≥85%、水分≤13%，符合GB4404.2要求；每种种质种子数量≥200粒，用于设置重复和备用。

盐胁迫试剂：选用分析纯氯化钠（NaCl），无杂质、无潮解，用于配制盐胁迫溶液。

辅助材料：蒸馏水、滤纸（定性滤纸，直径9cm或11cm，无杂质、吸水性好）、培养皿（玻璃或塑料，直径9cm或11cm，干净无破损）、标签纸、记号笔、镊子、吸水纸等。

4.2仪器设备

基础仪器：电子天平（精度0.01g）、容量瓶（500mL、1000mL）、烧杯、玻璃棒、移液管（10mL、20mL），用于配制盐胁迫溶液。

培养仪器：人工气候箱（可调控温度、湿度、光照，温度精度±1℃，湿度精度±5%，光照强度可调节至3000～5000lx），用于提供稳定的萌发鉴定环境；若无人工气候箱，可选用恒温培养箱（温度精度±1℃）配合光照设备。

测量与记录仪器：游标卡尺（精度0.02mm）、直尺（精度1mm）、电子计数器、相机、笔记本电脑、Excel表格，用于指标测量、数据记录与整理。

消毒仪器：高压蒸汽灭菌锅或紫外消毒灯，用于培养皿、滤纸等辅助材料的消毒，避免杂菌污染影响种子萌发。

5鉴定准备

5.1材料预处理

种子筛选与消毒：选取符合要求的大豆种质种子，用镊子去除破损粒、瘪粒、霉变粒及杂质；将筛选后的种子放入0.1%高锰酸钾溶液中浸泡10～15分钟，进行表面消毒，消毒后用蒸馏水冲洗3～4次，沥干表面水分，备用。

辅助材料消毒：培养皿、滤纸放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃、0.1MPa条件下灭菌20分钟，或用紫外消毒灯照射30分钟，消毒后取出，置于干净环境中冷却至室温备用；避免消毒后的材料再次污染。

5.2盐胁迫溶液配制

以蒸馏水为溶剂，选用分析纯NaCl配制不同浓度的盐胁迫溶液，根据大豆萌发期耐盐性鉴定需求，设置以下梯度浓度（可根据鉴定目的适当调整），配制过程严格遵循无菌操作原则：

对照溶液：蒸馏水（NaCl浓度0mmol/L），用于测定大豆种质本身的发芽能力。

轻度盐胁迫：NaCl浓度50mmol/L（约0.29%），模拟轻度盐碱地萌发环境。

中度盐胁迫：NaCl浓度100mmol/L（约0.58%），模拟中度盐碱地萌发环境，作为核心鉴定浓度。

重度盐胁迫：NaCl浓度150mmol/L（约0.87%），模拟重度盐碱地萌发环境，用于筛选