《羊无浆体巢式PCR检测技术规范》.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA355—2026

羊无浆体巢氏PCR检测技术规范

SpecificationofnestedPCRforthedetectionofsheepAnaplasma

2026-3-4发布2026-3-4实施

中国兽医协会发布

T/CVMA355—2026

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由河南农业大学提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：河南农业大学、河南牧业经济学院、永城市畜牧局。

本文件主要起草人：李森阳、菅复春、张龙现、王荣军、李俊强、毋亚运、彭永帅、李晓迎、杜海利、张素梅、宁长申、陈龙飞。

T/CVMA355—2026

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羊无浆体巢氏PCR检测技术规范

1范围

本文件规定了嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、绵羊无浆体、山羊无浆体四种羊无浆体检测的巢式PCR扩增要求，描述了相应的样品制备方法和结果判定的要求。

本文件适用于羊无浆体病的病原检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范兽医学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

无浆体Anaplasma

无浆体（Anaplasma）也称无形体，主要包括的种类有：绵羊无浆体（A.ovis）、山羊无浆体（A.capra）、牛无浆体（A.bovis）、嗜吞噬细胞无浆体（A.phagocytophilum）、中央无浆体（A.centrale）、边缘无浆体（A.marginale）等。我国可以感染羊的无浆体有绵羊无浆体、山羊无浆体、牛无浆体和嗜吞噬细胞无浆体4种。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（DeoxyribonucleosideTriphosphate）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSaline）

TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（Tris-Acetate-EDTABuffer）

5试剂、耗材和设备

T/CVMA355—2026

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5.1试剂

5.1.1除非另有说明，检测中所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682的要求。

5.1.2血液基因组DNA提取试剂盒。

5.1.3PCR扩增试剂盒。

5.1.4rTaq酶。

5.1.5LoadingBuffer。

5.1.61×TAE，见附录A中A.1。

5.1.71.0%琼脂糖（电泳级），见附录A.2。

5.1.8DNAGREEN核酸染料。

5.1.9巢式PCR引物。分别参照嗜吞噬细胞无浆体rrs基因、牛无浆体AB1基因、绵羊无浆体Msp4基因、山羊无浆体glta基因位点片段参考序列（见附录B中B.1、B.2、B.3、B.4），设计嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、绵羊无浆体、山羊无浆体巢氏PCR扩增特异性引物序列，见附录C。

5.1.10DNA标准分子量。

5.1.11阳性对照：已经鉴定的嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、绵羊无浆体和山羊无浆体DNA样品。

5.1.12阴性对照：灭菌双蒸水。

5.2耗材

5.2.11.5mL离心管、2mL离心管。

5.2.2100mL量筒、1000mL量筒。

5.2.31000mL烧杯。

5.2.4PE手套。

5.2.5抗凝采血管。

5.2.6150μLPCR管。

5.2.7不同规格的移液器和适配的枪头。

5.3设备

5.3.1冰箱。

5.3.2自动平衡离心机。

5.3.3恒温水浴锅。

5.3.4PCR扩增仪。

5.3.5核酸电