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基于电化学免疫传感器对AFP与HIVp24的精准检测技术探索

一、引言

1.1研究背景与意义

甲胎蛋白（AFP）作为原发性肝癌最重要的标志物和诊断的主要指标，在肝细胞癌的普查、诊断、治疗效果判断及复发预测等方面发挥着关键作用。正常***血清中AFP含量极低，一旦含量升高则患肝肿瘤的可能性增大，因此，痕量AFP的检测对于肝癌的早期发现和诊断具有重要意义。原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，死亡率仅次于胃癌和食管癌，且发病率呈上升趋势，我国每年约有大量患者死于肝癌，占全球肝癌死亡人数的相当比例。手术治疗虽为目前最佳方法，但给患者带来巨大痛苦和经济负担。为降低发病率和死亡率，减少手术对患者的身心负担，建立有效的原发性肝癌筛查方案迫在眉睫，而AFP检测是其中关键一环。

获得性免疫缺陷综合征（艾滋病，AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染导致的严重免疫缺陷性疾病。据卫生部统计，截至特定时间，我国累计报告HIV感染者和病人众多，局部地区和特定人群疫情严重，并逐渐向一般人群扩散，防治形势极为严峻。由于HIV具有高变异性，目前尚无有效的预防疫苗和治愈药物，预防感染成为控制AIDS的主要手段，而HIV感染的实验室诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分。

HIV病毒颗粒呈球形，二十面体立体对称，其p24蛋白是构成病毒核衣壳的主要结构蛋白，由gag基因编码的前体蛋白在蛋白酶的作用下裂解产生，氨基酸顺序高度保守，在HIV感染的检测中表现出良好的稳定性。p24抗原出现于HIV感染的早期，比抗体出现的时间早，在急性感染后病毒爆发性复制，与高度传染性的病毒血症相关联。对p24抗原的早期检测在HIV早期感染检测、血液筛查、新生儿HIV感染的诊断和监测治疗效果及疾病的进展方面具有重要意义。然而，急性感染后数周内，体内会出现特异性抗体，p24抗原与抗体形成免疫复合物，游离抗原浓度很低，常规方法无法检出，因此需要开发新的高敏感性方法，以便在低浓度情况下直接检出p24抗原。

目前，免疫分析技术虽已得到长足发展，建立了如凝集反应、荧光免疫测定技术、放射免疫分析技术、胶体金免疫测定法、免疫印迹学发光免疫分析技术、电化学发光免疫分析技术、免疫芯片、免疫组织化学等多种灵敏、高效的免疫分析方法，并在许多临床疾病诊断中广泛应用，极大地促进了临床免疫项目的更新和检测的自动化、智能化以及网络化。但是，这些方法仍然存在诸多不足，如放射免疫技术伴有不同程度的放射性污染；免疫印迹检测过程繁琐复杂，耗时较长；免疫组织化学需要借助显微镜观测且制备繁琐；化学发光和电化学发光需要昂贵的仪器，成本较高；其他如凝集反应、胶体金免疫技术等特异性和敏感性低，且不能准确定量。基层医疗机构尤其是偏远地区受到条件限制，在急诊手术前对病人进行快速筛检时，常规检测方法灵敏度低、特异性差、需时长、操作复杂，常常无法满足要求；此外，出于隐私和害怕受到歧视的原因，高危人群不愿前往医院、疾控中心等公开场所进行检测。

电化学免疫传感器融合了抗原-抗体反应的高亲和力和分子识别能力，以及传统免疫测试法和生物传感器技术，具有实时输出、高灵敏性、高特异性、操作简便和价格低廉的优点，已在食品、临床诊断、环境监测、食品安全等领域广泛应用。开发基于电化学免疫传感器的AFP和HIVp24检测方法，有望解决传统检测方法的局限性，为原发性肝癌和艾滋病的早期诊断、病情监测提供更为有效的手段，对降低疾病危害、控制疾病传播具有重要的现实意义。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在建立高灵敏、特异的AFP和HIVp24电化学免疫传感器检测方法，为原发性肝癌和艾滋病的早期诊断、病情监测提供新的技术手段。具体研究目的包括：优化电化学免疫传感器的制备工艺，提高传感器对AFP和HIVp24的检测灵敏度和特异性；对所构建的电化学免疫传感器进行全面的性能评价，包括灵敏度、特异性、稳定性、重现性和抗干扰能力等；将所建立的检测方法应用于实际样品的检测，验证其在临床诊断中的可行性和实用性。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：在材料创新方面，引入新型纳米材料对电极表面进行修饰，如具有独特金属导电性、高比表面积和众多官能团的二维材料Mxene，以及具有优良吸附性能的纳米金等，以提高传感器的灵敏度和稳定性。在检测模式创新方面，采用新的免疫识别和信号放大策略，如构建基于磁悬浮分离技术的免固定电化学免疫传感平台，实现均相生物识别，有效提高生物反应速率与生物识别效率，降低假阳性或假阴性概率。在应用拓展创新方面，将电化学免疫传感器同时应用于AFP和HIVp24的检测，为多疾病联合诊断提供新思路，有望在资源有限的基层医疗机构和现场快