微纳米聚苯乙烯塑料对卤虫的毒理学研究.pdfVIP

摘要

随着塑料消费量的急剧增长和回收处理能力的不足，塑料污染已成为全球性环

境问题，特别是微纳米塑料（micro-nanoplastics,MNPs）污染对海洋生态系统的长期

影响引起了科学界的广泛关注。卤虫（Artemia）是一种非选择性滤食浮游甲壳动物，

在食物链中扮演着重要角色。卤虫具有生命周期短、易饲养和独特的繁殖特性等优

点，是研究环境毒理学的理想实验生物。本研究选择50nm、500nm聚苯乙烯纳米塑

料（polystyrenenanoplastics,PSNPs）和5μm聚苯乙烯微塑料（polystyrene

microplastics,PSMPs）三种粒径塑料，明确其在人工海水中的物理表征和对卤虫存活

率的影响；研究急性暴露下（48h）不同粒径MNPs对卤虫肠道组织结构的影响，并

进一步揭示其急性暴露下的毒理学分子机制；聚焦慢性暴露下（10d、20d和35d）

50nmPSNPs对卤虫生殖表现的影响，并通过转录组对慢性暴露下的毒理学机制进行

深度解析。

研究发现，PSNPs在超纯水（milli-Qwater）和人工海水（artificialseawater,

ASW）两种介质中的物理表征显示出明显的差异，同一介质下随着粒径降低，分散

性（PDI）和稳定性（Zeta电位）均下降；相较于在milli-Qwater中，同一粒径

PSNPs在ASW中的分散性（PDI）和稳定性（Zeta电位）明显降低。场发射扫描电

子显微镜观察进一步验证了PSNPs在ASW中的聚集现象，50nmPSNPs形成的聚集

物直径最大约3μm，这与激光粒度仪的结果一致；同时观察到5μmPSMPs在两种介

质中分散均匀且无聚集现象。

与对照组相比，48h暴露后，50nmPSNPs在50mg/L浓度下显著降低了卤虫的

存活率（73.3%，p0.05）。组织病理学分析显示，经过HE染色后，50nmPSNPs暴

露导致卤虫肠道柱状上皮细胞形态向圆形转变、深染、胞质浓缩和“出芽”现象，指

示卤虫肠道组织的损伤和肠道细胞凋亡。Hoechst染色在细胞水平上做了进一步验证，

MNPs暴露造成卤虫肠道细胞脱落，排列不规则。

采用DCFH-DA荧光探针标记，揭示了MNPs暴露增加了肠道细胞活性氧（ROS）

的水平，其中50nmPSNPs暴露组绿色荧光最强烈，表明ROS水平显著上升；采用

JC-1荧光探针标记，发现MNPs暴露均增加了绿色荧光J-单体的比例，表明肠道细胞

处于早期凋亡。q-RTPCR结果显示，免疫相关基因（Serpinl2、ToLLIp、Hsp90和β-

arresin）表达显著变化；凋亡相关基因（p53、Bax、Bcl2、PIM1、API5和PDCD10）

在暴露于PSMPs后表现出粒径依赖性调节，与对照组相比，50nmPSNPs组Bax、

PIM1和PDCD10基因表达显著上调和Bcl2基因表达显著下调，表明50nmPSNPs暴

露后会导致卤虫肠道细胞凋亡。

将卤虫暴露在5mg/L50nmPSNPs10d、20d和35d下，统计观察对卤虫产后

代数量和幼体形态的影响。暴露10d和暴露35d后，均较对照组产卵的数量极显著

增加（p0.01）、产幼体的数量极显著减少（p0.0001），暴露35d后卤虫后代总数数

量极显著减少（p0.001）。对产出24h和48h后的F1代无节幼体进行观察发现，暴

露组无节幼体的发育正常，无畸形。

通差异基因富集分析显示，氧化还原过程、药物代谢和细胞色素P450对异生物

质的代谢相关基因的显著变化，提示NPs暴露引起的可能触发的特定毒物代谢机制。

线粒体内膜蛋白复合物的差异基因富集进一步表明NPs暴露下与线粒体能量代谢相

关基因表达的显著变化，表明细胞正在调整其能量产生过程以应对长期NPs暴露。

其次，碳水化合物代谢过程和有机磷代谢过程相关基因的显著变化，说明NPs通过

影响细胞内部的基本代谢过程，从而在更深层次上改变卤虫的生理状态。最后，类

固醇生物合成通路的下调趋势表明NPs慢性暴露减少了卤虫类固醇激素的生物合成