DNA重组技术的基本工具(上课用)1.ppt

专题1基因工程;苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。

让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。;提取目的基因;;1.1DNA重组技术的基本工具;（一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;;T;具有特异性。

一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子，;EcoRI限制酶的切割：;什么叫黏性末端？;CCCGGG;产生黏性末端或平末端。;如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？;（二）“分子缝合针”——DNA连接酶;可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，;;③类型：;将外源基因送入受体细胞。;1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。

2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。

3.具有某些标记基因，便于进行筛选。

4.对受体细胞无害、容易提取;质粒：;质粒：;;比较：DNA连接酶与DNA聚合酶;相同点：形成磷酸二酯键;1）不属于质粒被选为基因载体的理由是（）

A、能复制

B、有多个限制酶切点

C、具有标记基因

D、它是环状DNA;2）有关基因工程的叙述中，正确的是（）

A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B、质粒是基因工程中唯一的载体

C、载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与目的基因连接

D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键;3.下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是

A．①②B．②③C．③④D．②④;４、关于限制酶的说法中，正确的是（）

A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列

B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键

C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA

D．限制酶只存在于原核生物中;;思考与探究P7;3、天然的DNA分子可以直接用做

基因工程载体吗？为什么？;1）载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。

2）载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。

3）载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。

4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。

5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。

实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？;;限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。;谢谢大家！