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大规模猪场非洲猪瘟预防检测方案设计

1.选题背景

随着社会的极速发展，人们对于生活质量的需求日渐增加，猪肉

作为我国人民餐上最重要的动物性食品，它的消耗量巨大，随之的

繁殖场也日益增多，猪肉的生产管理日渐从散户到猪场管理，而随着

大规模的养殖，人民也开始担心疾控问题，成熟的大规模猪场已经会

本厂开始针对猪常规病原开展检测防疫工作，而非洲猪瘟作为急性感

染死亡率100%的一类动物疫情，到目前为止还没有专门针对非洲猪

瘟的抗病毒药物或者是特效疫苗，不可以有效的在疫情爆发时及时控

制病毒的传播，只能依靠监测预防，本文是根据实验室检测相关内容

对于非洲猪瘟进行描述以及大致的用监测来预防非洲猪瘟。

2.非洲猪瘟的背景

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒（又称为:ASFV）感染家猪、各类野

猪例（如欧洲悝下猪、非洲野猪等）然后引起的一种会出现急性的出血

性的烈性的传染病,病猪一般会有如食欲减退、无精神、发烧、呼吸

困难等一系列症状，在鼻子、耳朵等相应部位也会有紫斑。实验室用

P72基因来检测非洲猪瘟病毒。

非洲猪瘟病毒一般按基因分为野毒和疫苗毒珠，疫苗毒是直接就

使用白瓶疫苗，造成疫苗毒株会在猪体内毒力返强而发病的毒珠；野

毒就是非洲猪瘟病毒本身；非洲猪瘟野毒与疫苗毒一般是需要检测3

个基因来区分它们的，比较常监测的位点是CD2V基因或MGF360基

因，如果是野毒的话这些基因都会为阳性，疫苗毒的话都是为阿性。

因为目前临床上还没有大量商业化应用区分这两张毒珠感染的抗体,

对于我们猪场大规模检测而言成本过。而这两种毒珠之间本身具有

一定的抗原差异，相对抗体检测来说更经济实用。因我所在猪场实验

室所使用的鉴别非瘟毒珠的引物为MGF,所以下文引物都默认为MGF

引物鉴别。

3.非洲猪瘟的病原检测方法

现在我们实验室普遍采用的检测技术是实时荧光定量PCR技术

（也称为qPCR）,PCR是QPCR的前身，这是指将提取样本中的微量的

DNA模板放大后来研究模板的特性，PCR技术是通过凝胶电泳EB染色

或者通过同位素标记定量PCR的终产物量，而不能定量起始DNA模板

拷贝数。

实时荧光定量PCR技术就是在PCR反应体系中会加入荧光基团

（是荧光染料或者灵光标记的探针），随着PCR反应的持续进行，PCR

产物不断的复制累积，荧光信号强度会等比增强，每经过一个循环,

便会收集一个荧光强度的信号，仪器会通过荧光强度的变化来监测产

物量的变化，从而得到一条完整的扩增曲线。利用这个荧光信号积累

来实时检测整个PCR的进程，最终通过这条标准曲线对未知模板进行

定量分析的方法。

通过对PCR扩增反应中的每一个循环产物的荧光信号的实时监

测，从而对起始模板定性及定量的分析工

实时荧光定量PCR技术它实现了对DNA模板的定量，而且具有特

异性强、灵敏度和可靠性强，自动化程度，无污染等突出优势，

也因此被公认为是当今世界用于临床的最先进的核酸分子诊断技术。

因为PCR技术只能复制引物，而荧光定量PCR技术可以直接判读

阳性以及后续的区别毒珠工作，所以主流市场都已经淘汰PCR技术,

使用荧光定量PCR技术。

4.非洲猪瘟病原检测流程

4.1采样标准

这边猪厂送样采样的方法一般包括棉签（用于猪只的口鼻拭子采

样）、纱布（用于人员、车辆、环境采样）、抗凝管（采血）。在采样的

过程中，要求采样人员要注意勤更换手套，避出现交叉污染。因为

采样部分本身就具有概率属性，所以在采样的时候我们会要求重点照

顾发病的栋舍，栋舍内的死角，猪群、人员、车辆与物资现在或者曾

经频繁交叉出现的地方。

4.2样本的接收与处理

接收的样本类型一般包括一些拭子（环境拭子、人员拭子、车辆

拭子、猪拭子），血清，全血，粪便，乳汁组织，精液小样。组织样品

处理是选择有病变的组织，组