第二章基因工程的酶学讲课文档.pptVIP

第二章基因工程的酶学;;第3页，共115页。;第二章基因工程的酶学基础;第5页，共115页。;第6页，共115页。;(II类)限制性内切酶;首先由H.O.Smith和K.W.Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离出来。;一、限制性内切酶的基本特性;（2）内切酶与识别序列的结合模式;（3）切割位点;（4）粘性末端（stickyends，cohensiveends）;;①连接便利;;凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。;识别位点的序列相同的限制性内切酶。;XmaI5’-C?CCGGG-3’

3’-GGGCC?C-5’

SmaI5’-CCC?GGG-3’

3’-GGG?CCC-5’;识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。如BamHI、BglⅡ、BclI、XhoⅡ等;5’-?GATC----3’

3’----CTAG?-5’;二、DNA末端长度对限制酶切割的影响;在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切割扩增的PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。另外，了解末端长度对切割的影响还可帮助在双酶切多克隆位点时选择酶切秩序。;;????