第03章 细胞生物学研究方法.docVIP

第三章细胞生物学研究方法

细胞生物学研究方法

第一节细胞形态结构的观察方法

第二节细胞及其组分的分析方法

第三节细胞培养与细胞工程

第四节细胞及生物大分子的动态变化

第五节模式生物与功能基因组的研究

第一节细胞形态结构的观察方法

第一节细胞形态结构的观察方法

一、光学显微镜

二、电子显微镜

三、扫描隧道显微镜

一、光学显微(lightmicroscope)(P49,30)

(一)普通复式光学显微镜

组成：光学放大系统、照明系统、镜架及样品调节系统；

性能参数：放大倍数、分辨率、清晰度、焦点深度、镜像亮度等，其中最重要的是分辨率。

分辨率（分辨本领）：能区分开两个质点间的最小距离。该距离越小，则分辨率越高。

显微镜的分辨率计算公式：D=0.61λ/[Nsin(α/2)]

λ光源波长，α物镜镜口角，N介质折射率

光学显微镜的最大分辨率

α最大值140°；λ最小波长450nm；介质折射率N油浸下1.5（N空气1.0）；

因此普通光镜的分辨力极限为0.2微米，此数值亦为显微水平和亚微水平的分界点。（称为瑞利极限，Rayleighlimit）

普通光镜有效放大倍数（经验值）=

物镜最大镜口率（数值孔径NAnumericalaperture）×1000

提高光学显微镜分辨力的手段

a、缩短照明光线波长；

b、应用特殊光学效应，增强反差。

光学显微镜样品制备