流式细胞仪技术课件.ppt

流式细胞术

FlowCytometry（FCM）;概述;流式细胞仪技术在医学与生物学中的应用;FCM基本结构;FCM结构图;2.液流系统;流动室;提要;1流式细胞仪使用的基本知识;FSC和SSC的原理;前向散射光;侧向散射光;血细胞双参数点图;;常用荧光染料的特性;检测通道的确定;自发荧光的产生;消除非特异性结合-FcR阻断;对照的设置;激发光源与荧光标记物示意图;光谱重叠示意图;荧光补偿;;;光谱重叠的校正的示意图;多色荧光补偿的调节;设门的意义;细胞分选前后示意图;标本来源:

外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤)制成单细胞悬液

标本浓度：

106/ml-外周血白细胞计数，白血病人血标本需PBS稀释

抗凝剂：

EDTA、肝素-若抗凝不佳，有凝块，则不可检测。

溶血剂：

保持细胞形态、红细胞裂解完全。

反应温度：

26～27oC，室温避光。

细胞处理：;细胞处理：细胞固定和膜通透,抗体滴度;流式细胞仪检测的生物学意义;免疫细胞的鉴定及表型分析;白细胞簇分化抗原(ClusterDifferentiationAntigen，CD)系统;Th1和Th2细胞;细胞周期的分析;食管癌细胞株的细胞周期;流式细胞仪检测在临床诊断的应用;FCM在临床细胞免疫学中的应用;T淋巴细胞的Th和Ts细胞亚群;NK细胞和B淋巴细胞亚群;细胞内细胞因子的测定