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细胞培养与细胞系构建核心实验操作手册（医学细胞生物学常用）

前言

本手册旨在规范医学细胞生物学实验中细胞培养与细胞系构建的核心操作流程，明确各步骤的操作标准、关键要点及安全注意事项，确保实验结果的准确性、可重复性和安全性。本手册适用于医学实验室科研人员、研究生及相关技术人员，涵盖原代细胞培养、细胞传代、冻存与复苏、细胞系构建及鉴定等核心操作，结合医学细胞生物学常用细胞类型（如肿瘤细胞、正常组织原代细胞）的特性，突出实用性和规范性，为实验开展提供标准化指导。

第一章实验原理

1.1细胞培养原理

细胞培养是指在体外模拟体内生理环境（温度、pH、营养、气体环境等），将细胞从体内组织分离出来，在无菌、适宜的条件下进行培养，使其保持正常的生理功能和增殖能力的技术。医学细胞生物学常用的细胞培养包括原代培养和传代培养，原代培养是直接从机体组织中分离细胞进行培养，保留了体内细胞的部分原有特性；传代培养是将原代培养的细胞经过消化、分散后，转移到新的培养容器中继续培养，实现细胞的增殖和传代，满足实验对细胞数量和代次的需求。

1.2细胞系构建原理

细胞系是指原代培养细胞经过多次传代后，获得的具有稳定增殖能力、形态均一、遗传特性相对稳定的细胞群体。医学细胞生物学中，细胞系构建主要通过原代细胞传代纯化、细胞克隆、病毒介导的基因修饰等方式实现，核心是筛选出具有目标特性（如特定蛋白表达、耐药性、致瘤性等