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基因检测与精准医疗技术手册

第1章基因检测技术原理与基础方法

1.1全基因组测序技术概述

全基因组测序（WholeGenomeSequencing,WGS）是指以人类基因组为对象，对DNA分子所有碱基对进行测定，从而获得该生物体基因组的完整序列的技术。其核心目标是填补基因组中所有未编码区域（非编码区）的空白，全面解析基因组的结构、功能及变异特征。目前主流的全基因组测序技术包括Illumina平台（NGS）、IonTorrent平台及PacBio和OxfordNanopore平台。其中，Illumina平台因其高读长、高准确率（99.9%）及低成本优势，已成为临床基因检测的绝对主流。

在Illumina测序流程中，核心步骤包括文库构建、片段化、双链末端连接、桥式PCR扩增、荧光标记及测序仪读取。该技术采用“循环测序”模式，通过合成寡核苷酸引物将DNA片段固定在芯片上，利用荧光标记区分碱基，最终通过图像采集计算得到全长序列。为了获得高精度的全基因组序列，通常需要结合“双端测序”（BothEndSequencing）策略。即对测序片段的两端分别进行测序，例如读取150bp和250bp的片段，通过重叠区比对，可将测序错误率从单端测序的50%降低至0.1%以下。全基因组测序不仅用于疾病诊断，在药物研发中更是关键。