转印膜的简单介绍.pptVIP

印迹试验中转印膜的简单介绍Lola2015.5.20

培训内容以蛋白质印迹试验为例了解印迹试验的基本原理转印膜在印迹试验中的作用如何根据实验目的，选择转印膜常见的印迹试验转印膜的优缺点

WesternBlot由来印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年，Southern将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。

WesternBlot基本原理凝胶电泳：根据蛋白质在凝胶里的泳动速率不同，将其分离开来。转膜：用毛细管印迹法或者电泳印迹法将凝胶里的蛋白质转移到膜上，通过静电力和疏水键将蛋白质与膜表面的膜孔结合起来。封闭：用封闭液将膜表面未与蛋白质结合的孔封闭，避免在一抗与蛋白质杂交的过程中与膜孔发生非特异性结合，造成对靶蛋白的影响。一抗杂交：用与待研究的蛋白质具有特异性的抗体进行杂交，这样就可以通过一抗确定待研究的蛋白质的位置。二抗杂交：用与一抗具有特异性的二抗进行杂交，标记一抗的位置。显色：二抗一般是酶蛋白，用与这种酶蛋白发