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2025年生物医药研发与生产

第1章生物活性物质合成与修饰技术

1.1多肽与蛋白质定向偶联方法

1.1.1固相合成法（Solid-PhasePeptideSynthesis,SPPS）

以Fmoc策略为核心理念，通过活化的氨基与保护基团（如Boc或Fmoc）的酰基化反应实现肽链延伸，利用N-保护基团（如Boc或Fmoc）的酸敏感性与C-保护基团（如t-Boc或Fmoc）的碱敏感性的差异进行偶联。使用9-fluorenylmethoxycarbonyl（Fmoc）保护基团替代传统的Boc保护基，利用2,6-二叔丁基对甲酚（DBU）或三乙胺等强碱试剂在惰性溶剂（如DMF或DCM）中脱除氨基，实现肽链的自动化延伸。

采用2-(2,4,6-三甲基苯基)乙酰基（HBTU）或HATU等高效活化试剂，在DMAP催化剂存在下，将活性酯中间体与氨基酸偶联，同时利用HOBt或HOAt减少副反应并提高反应转化率。引入侧链保护基团（如Fmoc-DMT保护天冬氨酸或亮氨酸），利用酸敏感策略（如TFA/TIPS混合物）脱除侧链保护基，使肽链侧链暴露，为后续修饰做准备。采用TFA脱保护策略，在二氯甲烷或乙腈溶剂中，利用三氟乙酸（TFA）的强酸性条件脱除Fmoc保护基，同时通过加入乙胺（Et3N）作为掩蔽剂，