基因工程的主要操作技术及原理.pptxVIP

基因工程的主要操作技术及原理;DNA提取;总DNA提取;因材施提

依据不一样研究需要，确保结构对应完整性

尽可能排除其它大分子成份污染(蛋白质、多糖及RNA等)

确保提取样品中不含对酶有抑制作用有机溶剂及高浓度金属离子;1、植物细胞总DNA提取;（1）CTAB法：CTAB(cetyltriethylammoniumbromide)(十六烷基三甲基溴化铵);高盐提取低盐沉淀高盐溶解乙醇沉淀;操作步骤;5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA（10mg/ml），37℃保温1h以除去DNA中RNA。6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿：异戊醇（24：1）轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。

7、吸收上层水相并先后加入1/10体积3M醋酸钠及2倍总体积预冷无水乙醇，接着置于-20℃冰箱，10分钟后10000rpm离心10分钟，弃去无水乙醇，加入70％乙醇洗涤2-3次，风干，最终将DNA溶于适量（200-500μl）TE中。

8、待DNA完全溶解后进行1%琼脂糖凝胶电泳，检验DNA质量并据已知DNA分子量标准预计其浓度。调整浓度后DNA置于-20℃备用。;CTAB法优点;(2)SDS法;操作步骤;5.转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V冰预冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，（见丝状沉淀）-20℃放置30分钟沉淀核酸。

6.25℃，