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高中生物微专题：PCR的七种类型及应用

【基础强化】

1.PCR反应过程

2.PCR反应体系的配方

10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+）

5μL

20mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液（实为dNTP）

1μL

20μmol/L的引物Ⅰ

2.5μL

20μmol/L的引物Ⅱ

2.5μL

H2O

28～33μL

1-5U/μL的Taq?DNA聚合酶（即耐高温的DNA聚合酶）

1～2U

模板DNA?

5～10μL

总体积

50μL

3.仪器设备

??????

PCR仪??????????????微量离心管?????????微量移液器

【拓展归纳】

1.热启动PCR——先控温，好处多

正如探究温度对酶活性的影响实验，先把反应底物与酶分别控制好温度，再将它们混合，可以避免在未达到所设定温度时，酶就催化反应。迁移到PCR，先将反应底物加热到80℃以上，再混入酶，可减少在升温过程一些杂质引物结合，Taq酶就发挥作用，催化产生一些非目标DNA。

典例：（2021江苏卷）热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。下列叙述正确的有（???）?

A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃

B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物