细菌回复突变试验方法.docVIP

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附件6

细菌回复突变试验方法

BacterialReverseMutationTest

1范围

本方法规定了细菌回复突变试验的基本原则、要求和方法。

本方法适用于化妆品原料及其产品的基因突变检测。

2定义

2.1基因突变genemutation

在化学致突变物作用下DNA中碱基对的排列顺序发生变化。

2.2回复突变reversemutation

细菌在化学致突变物作用下由营养缺陷型回变到原养型（prototroph）。

2.3细菌回复突变试验bacterialreversemutationassay

利用一组组氨酸或者色氨酸缺陷型试验菌株测定引起细菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的氨基酸缺陷型回复突变为原养型的试验方法。

3原理

组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长；色氨酸营养缺陷型大肠杆菌不能合成色氨酸，故在缺乏色氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。

某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。

4仪器和设备

培养箱、恒温水浴、振