琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物.ppt

实验二琼脂糖凝

胶电泳检测PCR产物

实验目的实验原理实验仪器、材料与试剂实验步骤实验结果及讨论

实验目的了解琼脂糖凝胶电泳的原理掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方法

实验原理凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技术。根据制备凝胶的材料，分为琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳。琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实验方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观察，可检测到10ng的DNA），且检测的范围很广。

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数成反比。

琼脂糖是一种线性多糖聚合物。浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。琼脂糖浓度(%)线型DNA分子的分离范围(Kb)0.35～600.61～200.70.8～100.90.5～71.20.9～61.50.2～312.00.1～2

DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系，可依据DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得