PCR克隆与重组DNA技术探讨.pptVIP

一、酶切

1、核酸酶的分类：

核酸酶：通过切割相邻的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，从而造成核酸分子多核核苷酸链发生水解(shuǐjiě)断裂的蛋白酶。

核酸酶可分为两类：核酸外切酶（exonuclease）是从核酸的一端开始，一种接一种把核苷酸水解(shuǐjiě)下来；

核酸内切酶(endonuclease)则从核酸链中间水解(shuǐjiě)3’，5’磷酸二酯键，将核酸链切断。

;？假如内切酶能够(kěyǐ)切掉入侵的病毒DNA，为何它们不会破坏宿主细胞本身的DNA;限制修饰系统(xìtǒng)简称R/M系统(xìtǒng)

restrictionmodification;2、限制性酶切的原理：

限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease）能特异(tèyì)地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异(tèyì)位点上，并切割双链DNA。;;限制性酶切序列(xùliè);识别(shíbié)序列;4.影响核酸(hésuān)限制性内切酶活性的原因;5、限制性内切酶的星号(xīnghào)活性;二、DNA连接酶与DNA分子(fēnzǐ)的体外连接;T4连接酶作用分三步：

T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。

(2)酶－AMP