荧光定量PCR检测技术研究进展.pptVIP

市场部潘娜

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;实时荧光定量PCR定义：;荧光标识方法;

荧光标识法

TaqMan探针法;;绝对定量和相对定量;HRM分析;;;嵌入型染料--非饱和染料SYBR?GreenI

SYBR?GreenI对PCR有抑制作用，必需使用低浓度；虽然是高浓度，也不能饱和插入DNA双螺旋结构中的小沟

非饱和态结合使染料在熔解过程中发生重排，染料分子重新结合到双链DNA的空置位点，造成荧光信号没有变化，特异性下降;嵌入型染料--饱和染料LCGreen

饱和染料在饱和浓度（荧光最大）下，也不会抑制PCR；高浓度的染料饱和插入DNA双螺旋结构中的小沟，在DNA解链过程中就不会发生重排，熔解曲线有更高的辨别率

饱和染料主要有LCGreen、LCGreenPlus、CYTO9等;

目前市场上HRM分析仪器的供应商，有专用于HRM的仪器，还有附带HRM功效的RealTimePCR仪

;成功的HRM分析的先决条件;样品准备;试验设计准则;扩增子的设计方法;第一步：确定正确的周围序列;第二步：鉴定其它序列特性;第三步：拷贝含有目标位点的序列，避免那些蓝色位点;第四步：将目标序列粘贴到扩增子设计软件;第五步：建立引物设计参数;第六步：选择引物;第七步：检查二级结构;第八步：将引物序列与该物种基