DNA测序技术(1)优质课件.pptVIP

*Q11.什么是引物不纯？答：以下图为例：引物不纯造成移码现象，该种现象与模板杂在峰图都表现为背景峰较杂，但是引物不纯在峰图上表现的更有规律，一般在每一个主峰前都有一个同一碱基的小峰。解决方法：重新合成引物，或者将引物进行PAGE纯化后再进行测序。*Q12.重复结构对测序有哪些影响？答：以下图为例：重复结构将导致测序复制框的滑移，重复结构之后峰型混乱。解决办法：使用反向引物对模板进行测序，测到该重复结构处，即可完成模板全长的拼接。*Q13.什么是模板不单一？答：a：下图是pGEM-T载体测序的结果，在83位点处测序结果出现双峰，即模板中含有两个或两个以上的相同载体，但是插入片段不同。解决办法：重新挑取单克隆或者重新提取质粒。需要注意的是，重新进行PCR反应或者酶切鉴定仅能证明该克隆含有插入片段，并不足以证明模板的单一。*b：对于PCR产物也同样有模板不单一的情况，如下图所示：在197bp前测序峰表现为杂或有明显套峰，且在197bp位置有一个高高的A峰，峰标志着此PCR产物中有一个片段大小为200bp左右的小片段。解决方法：对PCR产物切胶纯化，再进行测序。*Q14.poly结构的测序结果是怎样的？答：以下图为例：以polyT为例，在polyA/T结构之后往往出现移码现象，而在