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分子生物学实验技术考试题库及答案

1.在琼脂糖凝胶电泳中，用于检测DNA的常用染料是什么？其工作原理是什么？

答案与解析：溴化乙锭（EthidiumBromide,EB）。其工作原理是溴化乙锭是一种扁平分子，能够嵌入DNA双螺旋的碱基对之间。在紫外光照射下，嵌入DNA中的溴化乙锭会发出橙红色荧光，其荧光强度与DNA含量大致成正比，从而实现对DNA的定位和粗略定量。由于EB是强诱变剂，现多使用毒性较低的替代染料如GelRed、SYBRSafe等，其原理类似，与DNA结合后荧光显著增强。

2.简述聚合酶链式反应（PCR）的基本原理及其三个主要步骤的循环温度与目的。

答案与解析：PCR是一种体外特异性扩增DNA片段的技术。其基本原理是在模板DNA、引物、四种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，通过温度循环控制，实现DNA的变性、退火和延伸，使目标DNA片段呈指数级增长。三个主要步骤为：①变性：温度通常为94-95°C，目的是使双链DNA模板解链成为单链；②退火：温度通常为50-65°C（取决于引物的Tm值），目的是使引物与单链DNA模板上的互补序列特异性结合；③延伸：温度通常为72°C（Taq酶的最适温度），目的是在DNA聚合酶催化下，从引物的3‘端开始，按照模板序列合成互补链。以上三步为一个循环，通常进行25-40个循环。

3.在蛋白质印迹（WesternBlotti