蛋白质分子量测定方法研究进展.ppt

蛋白质分子量测定方法研究进展第1页，共22页。

SDS凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳技术是实验室进行蛋白质研究中最常用的技术，兼有电泳和分子筛的双重作用。SDS是一种阴离子去污剂，可使蛋白质变性，与其蛋白质结合成带负电荷的蛋白质-SDS复合体，消除电泳过程中蛋白质所带电荷对电泳结果的影响，从而保证蛋白质电泳仅受分子质量大小的影响。在一定的电场作用下，该复合体沿着以聚丙烯酰胺凝胶形成的分子筛向电场的正极移动，从而将蛋白质根据他们的分子量大小而分开。蛋白质-SDS复合体：形状一定、电荷密度一定第2页，共22页。

SDS凝胶电泳上样：防止样品溢出、正负极、电压第3页，共22页。

SDS凝胶电泳当蛋白质分子量在10-200kDa时，样品的迁移率和分子量的对数呈对数关系，符合如下方程式：lgMW=-b﹒Rf+K其中，MW为蛋白质分子质量，Rf为相对迁移率，b为斜率，K为截距，当条件一定时，b和K为常数。因此通过已知分子量的蛋白和未知分子量蛋白的比较，就能得出未知蛋白的分子量。第4页，共22页。

影响分子量测定的因素很多，包括蛋白质与SDS的结合量的不同，凝胶浓度和交联剂浓度等，如图所示。研究者测定了当交联剂浓度不变，改变凝胶浓度，下图分别对应于凝胶浓度为5%，10%，15%。SDS凝胶电泳第5页，共22页。

优点：操作简单，容易掌握，成本低，分辨率高，重复效果好。缺点：对于电荷