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实验二Folin-酚法测定蛋白质含量

一、目的要求了解Folin–酚法测定蛋白质的原理，掌握Folin–酚法测定蛋白质含量的分析方

法。

二、实验原理

用化学法测定蛋白质含量的方法主要有凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin–酚比色法、考马

斯亮蓝比色法等。凯氏定氮法多用于贮存蛋白的测定；后者常用于可溶性蛋白的含量分析，它

们具有操作简便，迅速，可适合一般实验要求的特点。其中Folin–酚法较双缩脲法灵敏100倍，

与考马斯亮蓝比色法灵敏度相似，但干扰物对检测方法的影响不相同，选用时应予考虑。

Folin–酚试剂由甲、乙两部分组成。作用机理是：首先蛋白质中的肽键与碱性铜盐产生双缩

脲反应，生成铜—蛋白质复合物；然后该复合物还原磷钼酸—磷钨酸试剂，产生蓝色反应，其

呈色强度与蛋白质含量成正比。

所测定蛋白质样品中若含有酚及柠檬酸均对实验有干扰。浓度较低的尿素（约0.5%），三

氯乙酸（约0.5%），乙醇（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响。

若样品酸度较高，需提高碳酸钠—氢氧化钠溶液浓度1–2倍。

三、试剂和仪器

（一）试剂

1、酪蛋白标准溶液：称取50mg酪蛋白（预先用凯氏定氮法测定蛋白质含量），加30mL

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