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免疫荧光染色实验报告

一、实验材料与试剂准备

（一）实验样本

本次实验选取的样本为培养至对数生长期的人肝癌细胞系HepG2细胞，以及经4%多聚甲醛固定的小鼠肝组织冰冻切片。细胞样本提前接种于激光共聚焦专用培养皿中，置于37℃、5%CO?培养箱中培养24小时，待细胞融合度达到70%-80%时进行实验；组织样本取自8周龄C57BL/6小鼠，处死后迅速取肝组织，置于OCT包埋剂中速冻，随后用冰冻切片机切成8μm厚的切片，贴附于防脱载玻片上，-80℃保存备用。

（二）主要试剂

一抗：兔抗人Ki-67多克隆抗体（Abcam公司，货号ab15580），工作浓度1:200；鼠抗人α-微管蛋白单克隆抗体（CellSignalingTechnology公司，货号#3873），工作浓度1:500；兔抗小鼠CleavedCaspase-3多克隆抗体（CST公司，货号#9664），工作浓度1:300。

二抗：AlexaFluor488标记的山羊抗兔IgG（Invitrogen公司，货号A-11008），工作浓度1:500；AlexaFluor594标记的山羊抗小鼠IgG（Invitrogen公司，货号A-11005），工作浓度1:500。

其他试剂：4%多聚甲醛固定液（Sigma公司，货号P6148）；0.5%TritonX-100（Solarbio公司，货号T8200）；10%山羊血清