一种腐败梭菌PCR检测方法的建立与实践应用.pdfVIP

一种腐败梭菌PCR检测方法的建立与应用

腐败梭菌（）是一类革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌，广泛存在于

Clostridiumsepticum

土壤、污水及动物肠道中，其产生的α毒素（磷脂酶C）具有强烈的细胞毒性，可

高浓度与中浓度样本的批内批间均检出阳性低浓度样本的批内阳性检出率为批间阳性检出率为批内变异系数为批间变异系数为均表明方法的重复性良好结果稳定可靠表重复性验证结果样本浓度批内检出情况批内批间检出情况批间高浓度阳性阳性中浓度阳性阳性低浓度阳性阳

引发动物恶性水肿、人的气性坏疽等急性致死性疾病，对畜牧业安全生产与公共卫

生安全构成严重威胁。传统检测腐败梭菌的方法依赖分离培养、生化鉴定及毒素检

测，存在周期长（3-7天）、敏感性低（检出限≥10³CFU/mL）、操作复杂等问题，

难以满足临床快速诊断与疫病防控的需求。聚合酶链式反应（PCR）技术因具有特

异性强、敏感性高、检测快速等优势，已成为微生物检测领域的核心技术。本文基

于腐败梭菌保守基因设计特异性引物，建立其PCR检测方法，并通过临床样本验证

该方法的实用性，为腐败梭菌所致疾病的快速诊断与防控提供技术支撑。

一、材料与方法

（一）试验材料

1.菌株与样本：腐败梭菌标准菌株（A