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DNA电泳常见问题

凝胶电泳操作注意事项

1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移与荧光背景的强度,应有

选择地使用.

2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应与时倒入板中,避免倒入前凝固结

构如缺口超螺旋二聚体等富含碱基的迁移率比同分子量富含碱基的片段慢使用完好的梳子制胶带型异常不同样本的上样条选用相同的上样缓冲液上样量尽可能接近件不同上样量过大或过小核酸样品纯度差含有结合蛋白或高浓度的盐份选择合适大小的上样孔样品应完全覆盖点

块.倒入板中的凝胶应避免出现气泡,以免影响电泳结果.

3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH,应经常更新电泳缓冲液.

4、样品加入量：一般情况下,0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小与DNA

中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应

适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或弥散,对于较大的DNA此现象更明显.

5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品应使用同样的