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乳酸脱氢酶活性实验测定方法

乳酸脱氢酶（LactateDehydrogenase,LDH）是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，能够催化乳酸与丙酮酸之间的相互转化，是糖酵解和糖异生途径中的关键酶之一。LDH活性的测定在临床医学、生物化学研究、食品工业等领域具有重要意义，例如在急性心肌梗死、肝脏疾病、恶性肿瘤等疾病的诊断中，血清LDH活性的变化是重要的参考指标；在微生物发酵过程中，LDH活性可反映细胞的代谢状态和生长情况。目前，LDH活性的测定方法多种多样，每种方法都有其原理、适用范围和优缺点，以下将对常见的测定方法进行详细介绍。

一、比色法

（一）原理

比色法是基于LDH催化乳酸氧化为丙酮酸的反应过程中，辅酶I（NAD?）被还原为还原型辅酶I（NADH），NADH在340nm波长处有特征性吸收峰，通过测定反应体系中NADH的生成速率，即可计算出LDH的活性。反应式如下：

L-乳酸+NAD?$\stackrel{LDH}{→}$丙酮酸+NADH+H?

在一定范围内，NADH的生成量与LDH的活性成正比，通过分光光度计测定340nm处吸光度的变化率，结合摩尔吸光系数即可计算出酶的活性单位。

（二）实验步骤

试剂配制

Tris-HCl缓冲液（0.1mol/L,pH8.0）：称取12.11gTris（三羟甲基氨基甲烷），加入800ml蒸馏水溶解，用HCl调节pH至8