植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座.pptxVIP

试验六植物细胞骨架光学显微镜观察

一试验目标

1经过对洋葱内皮细胞处理，掌握植物细胞骨架制备方法与显微形态观察。

2掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色方法。

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二试验原理

细胞骨架是由蛋白质丝组成复杂网状结构，成份有微丝、微管和中间纤维。

TritonX-100可溶解抽提细胞中蛋白质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。

戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光学显微镜观察网状结构由微丝组成细胞骨架。

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三试验仪器、材料和试剂

1仪器、用具：普通光学显微镜等

2材料：洋葱鳞茎

3试剂：

⑴M-缓冲液

⑵6mmol/L磷酸缓冲液

⑶1%TritonX-100

⑷0.2%考马斯亮蓝R250

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三试验仪器、材料和试剂

3试剂：

⑸3%戊二醛

⑹50%、70%、95%乙醇

⑺叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶

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四试验方法(Ⅰ)

1洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→

50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉

2吸去缓冲液→加1%TritonX-100

20~30分钟

3吸去TritonX-100→M-缓冲液洗

3次/10分钟

43%戊二醛固定0.