蛋白质的研究方法与原理讲课文档.ppt

蛋白质的研究方法与原理;优选蛋白质的研究方法与原理;蛋白质的分离纯化包括以下过程：

1.破碎生物组织，并用适当的缓冲液将蛋白质抽提出来；

2.将有关的蛋白质分级沉淀下来;（盐析法或有机溶剂法）

3.应用层析法或电泳法使它们各自分开；

4.蛋白质结晶；

5.蛋白质纯度鉴定和含量测定。;制备过程中注意事项：

要求自始至终保持在天然状态

避免一切过激因素--如过酸或过碱，高温，

重金属等的影响。

2.通常都在低温条件下操作。

3.尽可能使样品中蛋白质的浓度维持在较高

水平。

;第二节蛋白质的分离与纯化技术;一、蛋白质沉淀与结晶;（一）盐析法

概念：将中性盐加入蛋白质溶液，破坏水化膜和电荷而使蛋白质沉淀，叫盐析。各种蛋白质盐析所需的盐浓度及PH不同，加入不同浓度的中性盐可使各种蛋白质依次分别沉淀出来。

优点：操作简便

对易变性的蛋白质有一定的保护作用，

适用范围十分广泛。

缺点：分辨能力差，纯化倍数低;

（1）盐的种类

对同一种Pr而言，价数愈高的盐离子，盐析能力

也愈强:

PO3-4＞SO42-＞C2O42-＞（CHOHCOO-）2＞

AC－＞CL－＞NO3-＞Br-＞I-＞CNS-

K+＞Rb+＞Na+＞Cs+＞Li+＞