第六章 经典液相色谱法.pptVIP

四、操作方法1、柱色谱1）固定相的涂布与装柱装柱：湿法、干法2）加样和洗脱1）加样：湿法、干法2）洗脱：正相色谱：流动相极性由小至大变化反相色谱：流动相极性由大至小变化2、纸色谱法将固定相放在纸上，以纸作载体，进行点样、展开、定性、定量的液—液分配色谱法。固定相：纸纤维结合的水分（或甲酰胺等）流动相：以水饱和有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：同液—液分配色谱定性参数：Rf讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关极性组分（亲水性强，在水中分配量多）：易保留，Rf小非极性组分：易流出，Rf大四、操作方法1）色谱纸的选择和处理A、滤纸的选择：均匀、平整；机械强度；有足够的纯度；纤维松紧适宜、薄厚适当、展开移动速度适中。B、滤纸的处理：缓冲溶液处理，用于测定酸、碱。2）反相纸色谱A、亲脂性液层为固定相，水或亲水性溶剂为流动相，适用于亲脂性化合物的分离。B、乙酰化滤纸：滤纸纤维经化学处理。具有疏水性。2）点样3）展开剂选择：正丁醇—乙酸—水，应先与水一起振摇，分层后分离被水饱和的有机层来做展开剂。4）展开：①饱和；②加滤纸条；③上行展开方式。5）检出：同薄层色谱法。注意：不能用腐蚀性显色剂6）含量测定：A、剪洗法，再用分光光度法，准确度5%.B、直接比色法，半定量，比较颜色深度。C、薄层扫描定量，只能用反射法。5—