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分子生物检验技术岗位面试题及详细答案（实操接地气版）

一、基础理论类（必考基础）

1、请简单说说PCR的原理，以及普通PCR和实时荧光定量PCR（qPCR）的核心区别？

参考答案：

PCR的核心原理是DNA的半保留复制，依靠变性、退火、延伸三个温度阶段的循环反应，在体外快速特异性扩增目标基因片段。变性是高温解开DNA双链，退火是低温让引物结合到目标模板两端，延伸是中温下Taq酶合成新的DNA链，不断循环实现片段指数级扩增。

普通PCR和qPCR最大的区别在于检测方式和定量能力：

第一，普通PCR是终点检测，反应结束后通过琼脂糖凝胶电泳看条带，只能定性判断样本有没有目标基因，无法判断含量多少；

第二，qPCR是实时检测，反应过程中通过荧光信号实时监测扩增情况，既能定性，又能根据Ct值精准定量，灵敏度、特异性更高，污染风险也更低，也是目前临床分子检测的主流技术。

2、什么是Ct值？Ct值高低代表什么意义？

参考答案：

Ct值就是荧光定量PCR的循环阈值，指PCR扩增过程中，仪器检测到的荧光信号刚好超过基线阈值时对应的循环数。

Ct值和样本中初始模板核酸含量成反比。简单来说，样本里目标核酸越多，起峰越早，Ct值越小；核酸含量越少，起峰越晚，Ct值越大。

临床常规判定：一般Ct值≤38为阳性，38–40为可疑弱阳性，需要复查；＞40基本判定为阴性。不同项目试剂盒参考标准会略有差异，以试剂